操作流程如下 ：
（1）待測樣品孔中每孔參加待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔 ；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl ；另設一個空白對照孔 ，參加純細胞裂解液100μl 。 （2）酶標板置4℃ ，包被 。
（3）洗板 ：吸幹孔內反響液 ，用洗刷液過洗一遍（將洗刷液注滿板孔後 ，即甩去） ，之後將洗刷液注滿板孔 ，浸泡1-2分鍾，間歇搖擺 。甩去孔內液體後在吸水紙上拍幹 。重複洗刷3-4次 。
（4）陰性對照孔每孔參加PBS 50μl ，樣品孔及空白孔每孔參加1 ：500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl 。
（5）酶標板置37℃培養箱的濕盒內 ，孵育60min 。
（6）洗板 ，同（4） 。
（7）每孔加1 ：5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl 。
（8）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min 。
（9）洗板，同（4） 。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl ，悄悄混勻10s ，置37℃暗處反響15-20min 。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反響。
（12）別離測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2 ，終究測得的OD值為兩者之差（W1-W2） ，以削減由容器上的劃痕或指印等形成的光幹擾 。
（13）數據處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值後 ，核算S/N值 。S/N≥2.1為陽性斷定規範 。
注 ：所用溶液配方
(1) PBS ：稱取0.2g KH2P04, 2.9g Na2HP04?12H20 、8.0g NaCl, 0.2g KCl，加雙蒸水至1000ml 。
（2）包被緩衝液 ：稱取1.59g Na2CO3, 2.938 NaHCO3 ，加雙蒸水至 1000m1 。
（3）洗刷液(PBST) ：含0.05% Tween-20的PBS 。
（4）稀釋液 ：含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS ，首要用以稀釋抗體 、規範品 、樣品 。
（5）TMB顯色液 ：稱取1.84g Na2HP04.12H20, 0.51 g檸檬酸 ，加雙蒸水至1O0ml ，配成檸檬酸-磷酸緩衝溶液 。用10.5 ml 檸檬酸-磷酸緩衝溶液溶解1錠TMB ，再參加35μl 3% H2O2
（6）細胞裂解液 ：1% TritonX-100 ，137mmol/L NaCl ，20mmol/L Tris-HCl ，2mmol/L EDTA ，1mmol/L PMSF ，pH 7.4 。（其間PMSF溶於異丙醇中 ，配成1O mmo/L ，-20℃ 儲存備用 。
Carnosol    20mg    鼠尾草酚    5957-80-2
Caryophyllene oxide    20mg    石竹素    1139-30-6
Catalpol    20mg    梓醇    2415-24-9
Catechin    20mg    兒茶精 ； 兒茶素 ； (2R,3S)-2-(3,4-二羥基苯基)-3,4-二氫-2H-苯並吡喃-3,5,7-三醇    154-23-4
Caudatin    20mg    告達亭苷元    38395-02-7
Celastrol    20mg    紅素; 南蛇藤素    34157-83-0
Cephalomannine    20mg    三尖杉寧堿    71610-00-9
Cepharanthine    20mg    千金藤素    481-49-2

 

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