一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩衝液
。但有時由於試驗的需要
,包被原的特殊性也可能采用中性的緩衝溶液來包
。應注意
:
由於蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的
,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表麵的疏水基團間的作用
,這種物理吸附是非特異性的
,受蛋白質的分子量
、等電點
、濃度等的影響
,大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團
,故更易吸附到固相載體表麵
。具體的試驗還要有堅固的理論外也要實踐
,看一下zui終可不可以應用到自己試驗當中去
。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩衝液
,還有pH7.2的磷酸鹽緩衝液和pH7-8的Tris-HCL緩衝液等等
。
封閉
繼包被之後用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程
。封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙
,從而排斥ELISA後的步驟中幹擾物質的再吸附
。
常用封閉劑有
:0.05%-0.5%的BSA
;10%的小牛血清或1%明膠
;脫脂奶粉
,比較價廉
,可以高濃度使用(5%-10%)
;還有一些稀有用到的各種動物血清和酪蛋白等等
。但zui終選用什麽
,要依據試驗具體來實踐
。
洗滌板
可以說在操作中
,洗滌是zui主要的關鍵技術
。因為聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的
,為達到分離遊離的和結合的酶標記物的目的
,清除殘留在板孔中遊離的物質
,以及非特異性地吸附的幹擾物質
,在洗滌時又應把這種非特異性吸附的幹擾物質洗滌下來
。所以在洗板時會有一定誤差
,人為因素很大(當然有條件的用洗板機除外)
,洗的不*或串了孔
,對如此靈敏的ELISA係統可是不小的影響
。
STET 緩衝液 500ML 0 STET BUFFER
SOUTHERN 試劑盒(含膜) 10 x 10 square cm 0 TOTAL BLOT SOUTHERN KIT W/ MEMBRANE
SOUTHERN 試劑盒(不含膜) 1 Kit 0 TOTAL BLOT SOUTHERN KIT W/OUT MEMB.
SOC 培養基 100ML 0 SOC MEDIA
SOC 培養基 6x5ml 0 SOC MEDIA
RNA貯存液 12x1ML 0 RIBORESERVE RNA STORAGE SOLUTION
RNA貯存液 50ML 0 RIBORESERVE RNA STORAGE SOLUTION
RNA膠上樣試劑盒 100 reactions 0 RNA GEL LOADING KIT
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