① ：實驗中樣品都要做複孔或三孔 ，然後計算每個濃度標準品的平均OD值 ，複孔的變異係數應該小於20% 。
② ：平均OD值減去空白孔的OD值 。
③ ：製作標準曲線 。
以減去本底後的OD值為X軸 ，標準品的濃度為Y軸 ，利用作圖軟件得出一個合適的計算方法 。建議使用合適的軟件來作圖 ，比如CurveExpert 1.4 。這款軟件能夠給出很多種方法（比如直線 、半對數 、對數 、四參數方程等）並從中選擇一條zui合適的方程 。要想檢驗某條曲線是否與表中數據吻合 ，可以將標準品的濃度作為未知數 ，將對應的OD值帶入該方程 ，計算出標準品的濃度 ，得到的結果應該與實際濃度很接近（+/-10%） 。選擇擬合度的那條曲線 。
如果出現標準曲線的線性不好 ，或平行性不好（雙孔對照孔的OD值差別很大） ，或出現跳孔的現象 ，可能引起的原因有酶標板孔間相互汙染 、洗板後未能盡快進行下一步操作 、添加樣品或其它試劑時操作的方法不對、孵育位置避光性不佳或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸發 、酶標板孔問加入的試劑量不同 ，相對應的解決辦法是加樣時請小心勿將液體濺人另一孔中 ，人工洗板時也請小心 ，勿將洗滌液濺人另一微孔中 、在洗板後及時進行下一步操作 、添加試劑時請懸空滴入 ，切記勿將槍頭接觸到板孔內 ，吸取不同試劑瓶中的液體時就要更換一次槍頭 、確認孵育環境不透光 ，蓋板膜將酶標板密封好 、使用已校正過的微量加樣器 ，如將次加入液體時槍頭上留有一滴的液體滴下 ，那麽將以後槍頭上留有的液體也滴下 ，以保證加入液體體積的一致性 。

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