實驗開始前
，請提前配置好所有試劑
，試劑或樣品稀釋時
，均需混勻
，混勻時盡量避免起泡
。如樣品濃度過高時
，用樣品稀釋液進行稀釋
，以使樣品符合試劑盒的檢測範圍
。
1. 大鼠A（CsA）ELISA試劑盒加樣
：分別設空白孔
、待測樣品孔
。空白孔加樣品稀釋液100μl
，餘孔加待測樣品100μl
，注意不要有氣泡
，加樣將樣品加於酶標板孔底部
，盡量不觸及孔壁
，輕輕晃動混勻
，酶標板加上蓋或覆膜
，37℃反應120分鍾
。
2. 棄去液體
，甩幹
，不用洗滌
。每孔加辣根過氧化物酶標記抗小鼠IgG工作液
100μl（取1μl標記抗體加99μl標記抗體稀釋液的比例配製
，輕輕混勻
，在使用前一小時內配製）
，37℃
，60分鍾
。
3. 溫育60分鍾後
，棄去孔內液體
，甩幹
，洗板5次
，每次浸泡1-2分鍾
，350μl/每孔
，甩幹
。
4. 依序每孔加底物溶液90μl
，37℃避光顯色（30分鍾內
，此時肉眼可見孔內有明顯藍色
，即可終止）
。
5. 依序每孔加終止溶液50μl
，終止反應（此時藍色立轉黃色）
。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同
。為了保證實驗結果的準確性
，底物反應時間到後應盡快加入終止液
。
6. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）
。 在加終止液後15分鍾以內進行檢測
。
注
：1. 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鍾
，以便試劑集中到管底
。
2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔
，該孔不加任何試劑
，隻是zui後加底物溶液及2N H2SO4
。測量時先用此孔調OD值至零
。
3. 為防止樣品蒸發
，試驗時將反應板放於鋪有濕布的密閉盒內
，酶標板加上蓋或覆膜
。
4. 未使用完的酶標板或者試劑
，大鼠A（CsA）ELISA試劑盒請於2-8℃保存
。辣根過氧化物酶標記抗小鼠IgG工作液請依據所需的量配置使用
。請勿重複使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標記抗小鼠IgG工作液
。
5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定
，以保證檢測結果的準確性
。