试剂盒内容及其配制
人脱羧酶自身抗体ELISA试剂盒试剂盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶标板 1块板（96T） 半块板（48T） 即用型
塑料膜板盖 1块 半块 即用型
标准品 ：800pg/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按说明书进行稀稀
空白对照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
标准品稀释缓冲液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
标记的抗IL-2抗体 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗涤缓冲液 1瓶（60ml） 1瓶（30ml） 按说明书进行稀释
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
终止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
自备材料
蒸馏水 。
加样器 ：5ul 、10 ul、50 ul 、100 ul、200 、500 u、1000lul。
振荡器及磁力搅拌器等。
人脱羧酶自身抗体ELISA试剂盒安全性
此试剂盒的人血制品中的HbsAg 、和抗HIV为阴性 ，但没有实验室可*保证此血制品不会传染肝炎、AIDS或其它传染病，依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品 。
避免直接接触终止液和底物A、B 。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份 。
操作注意事项
试剂应按标签说明书储存 ，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃 ，不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中 ，密封保存，以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好 。不同批号的试剂不要混用 。保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染 ，吸取终止液和底物A 、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液 。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品 。
洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发 ，避免长时间打开盖子 。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值 。
加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间 、加液的量及顺序进行温育操作。
人脱羧酶自身抗体ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法
血清-----操作过程中避免任何细胞刺激 。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后 ，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
保存------如果样品不立即使用 ，应将其分成小部分-70 ℃保存 ，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤 。不要在37℃或更高的温度加热解冻 。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻 。
试剂的准备
标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀 。稀释比例按下表中进行：
800 pg/ml （6号标准品） 原倍浓度不用稀释直接加入50ul 。
400 pg/ml （5号标准品） 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
200 pg/ml （4号标准品） 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
100 pg/ml （3号标准品） 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
50 pg/ml （2号标准品） 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
25 pg/ml （1号标准品） 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 pg/ml （空白对照） 原始浓度不用稀释直接加入50ul 。
洗涤缓冲液（20×）的稀释 ：蒸馏水20倍稀释。
操作步骤
使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒 ，甩去洗涤液 ，用吸水纸拍干。重复此操作四次。如果用洗板机洗涤 ，洗涤次数增加一次。
每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP ，轻轻振荡混匀 ，37℃温育30分钟。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液 ，用吸水纸拍干 。重复此操作四次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育15分钟。避免光照。
取出酶标板 ，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
在450nm波长处测定各孔的OD值。