Folin-酚法測定蛋白質含量實驗方法
實驗室較多用用Folin-酚法測定蛋白質含量
，此法的特點是靈敏度高
，較雙縮脲高兩個數量級
，較紫外法略高
，操作稍微麻煩
，反應約在15分鍾有zui大顯色
，並zui少可穩定幾個小時
，其不足之處是幹擾因素較多
，有較多種類的物質都會影響測定結果的準確性
。
【原 理】
蛋白質中含有酚基的
，可與酚試劑中的磷鉬鎢酸作用產生蘭色化合物
，顏色深淺與蛋白含量成正比
。
【操 作】
1
、標準曲線的製備
：
按下表操作
，在試管中分別加入0
、0.2
、0.4、0.6
、0.8
、1ml蛋白標準溶液
，用生理鹽水補足到1ml
。加入5ml的堿性酮試劑
，混勻後室溫放置20分鍾後
，再加入0.5ml酚試劑混勻
。
編 號 1 2 3 4 5 6 蛋白標準（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.9% NaCl（ml） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 堿性酮試劑（ml） 5 5 5 5 5 5 混勻後室溫(25℃)放置20分鍾 酚試劑（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 30分鍾後
，以第1管為空白
，在650nm波長比色
，讀出吸光度
，以各客的標準蛋白濃度為橫坐標
，以其吸光度為縱坐標繪出標準曲線
。
2
、血清蛋白質測定
。
稀釋血清（或其它蛋白樣品濃度）
：準確吸取0.1ml血清
，置於50ml容量瓶中
，用生理鹽水釋釋至刻度（此為稀釋500倍
，其它蛋白樣品酌情而定）
。再取三隻試管
，分別標以1
、2
、3號
，按下表操作
：
編 號 測定管 標準管 空白管 稀釋標本(ml) 0.2 — — 稀釋標準液(ml) — 0.2 — 0.9%NaCl(ml) — — 0.2 堿性酮液(ml) 1.0 1.0 1.0 混勻後於室溫放置20分鍾 酚試劑(ml) 0.1 0.1 0.1
混勻各管
，30分鍾後
，在波長650nm比色
，讀取吸光度
。
【計 算】
1
、以測定管讀數查找標準曲線求得血清蛋白含量
。
2、無標準曲線時，可以與測定管同樣操作的標準管按下式計算蛋白含量
。