過碘酸鹽氧化法 ：本法隻適用於含糖量較高的酶 。辣根過氧化物酶的標記常用此法 。反應時 ，過碘酸鈉將HRP分子表麵的多糖氧化為醛基很活潑 ，可與蛋白質上的氨基形成Schiff氏堿而結合 。酶標記物按克分子比例聯結 ，其比例為 ：酶/抗體=1-2/1 。此法簡便有效 ，一般認為是HRPzui可取的標記方法 ，但也有人認為所有試劑較為強烈 ，各批實驗結果不易重演 。 按以上方法製備的酶結合物一般都混有未結合物的酶和 。理論上 ，結合物中混有的遊離酶一般不影響ELISA中zui後的酶活性測定 ，因經過*洗滌 ，遊離酶可被除去 ，並不影響zui終的顯色 。ELISA試劑盒但遊離的抗體則不同 ，它會與酶標抗體競爭相應的固相抗原 ，從而減少了結合到固相上的酶標抗體的量 。
 ELISA試劑盒中常用的酶一般都用此法交聯 。它具有操作簡便 、有效（結合率達60%-70%）和重複性好等優點 。缺點是交聯反應是隨機的 ，酶與抗體交聯時分子間的比例不嚴格 ，結合物的大小也不均一 ，酶與酶 ，抗體與抗體之間也有可能交聯 ，影響效果 。諏講椒ㄖ校?br> 先將酶與戊二醛作用 ，透析除去多餘的戊二醛後 ，再與抗體作用而形成酶標抗體 。ELISA試劑盒也可先將抗體與戊二醛作用 ，再與酶聯結。兩步法的產物中絕大部分的酶與蛋白質是以1:1的比例結合的 ，較一步法的酶結合物更有助於本底的改善以提高敏感度 ，但其偶聯的有效率較一步法低 。 

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