初代組織塊培養法
1.剪切
：把組織小塊置於小燒杯或小瓶中
，用Hanks液漂洗二三次以去掉表麵血汙
，吸靜Hanks液
，用眼科剪反複剪切1mm3塊為止
。
2.擺布
：用彎頭吸管吸取若幹小塊
，置於培養瓶中
，用吸管彎頭把組織小塊擺布在培養瓶底部，小塊相互距離以0.5cm為宜
，每一25ml培養瓶底可擺布20~30塊
。
3.輕輕翻轉培養瓶
，另瓶底向上
，注意翻瓶時勿另組織小塊流動
，塞好瓶塞
，置36.5℃溫箱培養2小時左右（勿超過4小時）
，使小塊微幹涸
。
4.培養
：從微箱中取出培養瓶，開塞，46度斜持培養瓶
，箱瓶底腳部輕輕注入培養液少許
，然後緩緩再把培養瓶翻轉過來
，讓培養液慢慢覆蓋附於瓶地上的組織小塊
。置溫箱中靜止培養
。待細胞從組織塊遊出數量增多後
。再補加培養液
。
傳代培養法
原理
在培養瓶長成致密單層後
，已基本上飽和
，為使細胞能繼續生長
，同時
也將細胞數量擴大
，就必須進行傳代（再培養）
。 傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法
。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程
。懸浮型細胞直接分瓶就可以
，而貼壁細胞需經消化後才能分瓶
。
材料和試劑
1.細胞
：貼壁細胞株
2.試劑
：0.25％
、1640培養基（含10％小牛血清）
3.儀器和器材
：倒置顯微鏡
，培養箱
、培養瓶
、吸管
、廢液缸等
操作步驟
1.吸除培養瓶內舊培養液
。
2.向瓶內加入和EDTA混合液少許，以能覆滿瓶底為限
。
3.置溫箱中2~5分鍾，當發現細胞質回縮
，細胞間隙增大後
，立即終止消化
。
4.吸除消化液
，向瓶內注入Hanks液數毫升
，輕輕轉動培養瓶
，把殘餘消化液衝掉
。注意加Hanks液衝洗時
，動作要輕
，以免把已鬆動的細胞衝掉流失
，如用液單獨消化
，吸除液後
，可不用Hanks液衝洗
，直接加入培養液
。
5.用吸管吸取營養液輕輕反複吹打瓶壁細胞
，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液
。
6.計數板計數後
，把細胞懸液分成等份分裝入數個培養瓶中
，置溫箱中培養
。
無菌操作注意事項
1.操作前要洗手
，進入超淨台後手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試
。試劑等瓶口也要擦試
。
2.點燃酒精燈
，操作在火焰附近進行
，耐熱物品要經常在火焰上燒灼
，金屬器械燒灼時間不能太長
，以免退火
，並冷卻後才能夾取組織
，吸取過營養液的用具不能再燒灼
，以免燒焦形成碳膜
。
3.操作動作要準確敏捷
，但又不能太快
，以防空氣流動
，增加汙染機會
。
4.不能用手觸已消毒器皿的工作部分，工作台麵上用品要布局合理
。
5.瓶子開口後要盡量保持45℃斜位
。
6.吸溶液的吸管等不能混用