1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀 ，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后 ，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分） 。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心 。胸腹水 、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时 ，用无菌管收集 。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清 。检测细胞内的成份时 ，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本 ：切割标本后，称取重量 。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用 。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4） ，用手工或匀浆器将标本匀浆充分 。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清 。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
标准品的稀释与加样 ：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在* 、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔 、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl ，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉 ，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五 、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中 ，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七 、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中 ，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉 。（稀释后各孔加样量都为50μl ，浓度分别为60 mIU/ml，40 mIU/ml ，20 mIU/ml，10 mIU/ml ， 5mIU/ml） 。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl ，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部 ，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液 ：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体 ，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次 ，拍干 。
加酶 ：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外 。
温育：操作同3。
洗涤 ：操作同5 。
显色 ：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl ，轻轻震荡混匀 ，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
测定：以空白空调零 ，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项 ：
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用 ，酶标包被板开封后如未用完 ，板条应装入密封袋中保存 。
浓洗涤液可能会有结晶析出 ，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果 。
各步加样均应使用加样器 ，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内 ，如标本数量多，使用排枪加样。
请每次测定的同时做标准曲线，做复孔 。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5） 。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
底物请避光保存。
严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理 。
本试剂不同批号组分不得混用。
本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定小鼠血清 ，血浆及相关液体样本中β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)的活性。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)水平 。用纯化的小鼠β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)，再与HRP标记的β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)抗体结合 ，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色 。颜色的深浅和样品中的β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值） ，通过标准曲线计算样品中小鼠β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)的浓度。
上一篇 讲解实验注意事项及性能 下一篇 测定结果不一致常见原因分析