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      测定氨基酸含量
      点击次数:1325 更新时间:2016-02-26

          水溶液中的氨基酸为兼性离子,因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合 ,形成—NH—CH2OH 、—N(CH2—OH)2 等羟甲基衍生物,使N+H3上的H+游离出来,这样就可以用碱滴定N+H3放出H + ,测出氨基氮,从而计算氨基酸的含量 。

          若样品中只含有单一的已知氨基酸,则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨基酸(如蛋白质水解液),测不能由此法算出氨基酸的含量 。 

          与甲醛作用后,生成的化合物不稳定 ,导致滴定后结果偏低;含酚基结构,导致滴定结果偏高。 

      测定氨基酸含量的材料 、试剂与器具 

      (一)试剂 

      1 、0.5%酒精溶液 

      称0.5g溶于100ml60%酒精中。 

      2 、0.05%溴蓝溶液 

      取0.05溴麝行草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中 。 

      3 、1%溶液 

      取1g溶于100ml蒸馏水。 

      4 、标准0.100mol/L 氢氧化钠溶液 

      5 、中性甲本醛溶液 

          取50ml,加0.5%指示剂约3ml,滴加0.1mol/LnaOH溶液,使溶液呈微粉红色 ,临用前中和。 

      (二)实验器具 

      1、锥形瓶 2 、碱式滴定管 

      3、 移液管洗耳球 4 、天平 

      5、容量瓶 6 、试剂瓶 

      7、量筒 8 、玻棒与烧杯 

          注意事项  :利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。随着蛋白质水解度的增加,滴定值也增加,当蛋白质水解完成后,滴定值不再增加 。

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