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      猪托克特诺病毒PCR检测试剂盒​准备试剂与收集血样
      点击次数:596 更新时间 :2023-11-07

      准备试剂与收集血样:

      双重核酸试剂盒(荧光PCR法) 1.  收集标本:血清 、血浆(EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测 , 2-8 ℃ 保存48 小时;更长时间须冷冻( -20   ℃或 -70   ℃ )保存,避免反复冻融。

      2.  标准品液配制:使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀,配成 120 0ng/ml 的溶液  。 设标准 管 8 管,管加标本稀释液 900ul ,第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul  ,移至第二管 。如此反复作对倍稀释,从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照 。

      3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释( 示例 : 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水) 。

      4.  洗涤液 :用重蒸水 1:20 稀释(示例:1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水)

      检测程序:

      1.  加样 :每孔各加入标准品或待测样品 100ul  ,将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。

      2.  洗板 :用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次 ,向滤纸上印干。

      3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。

      4.  洗板 :同前。

      5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。

      6.  洗板:同前。

      7.  每孔加入底物工作液100ul ,置 37   ℃ 暗处反应15 分钟 。

      8.  每孔加入100ul 终止液混匀。

      9.  30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。

      性能:

      1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。

      2. 灵敏度:检测浓度小于0.1 U/mL。

      3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

      4. 重复性  :板内、板间变异系数均小于15%。

      5. 贮藏:2-8℃ ,避光防潮保存。

      6. 有效期 :6个月


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