準備試劑與收集血樣 :
雙重核酸試劑盒(熒光PCR法) 1. 收集標本 :血清 、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽 、肝素抗凝) 、細胞培養上清液 、組織勻漿等盡早檢測 , 2-8 ℃ 保存48 小時 ;更長時間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反複凍融。
2. 標準品液配製 :使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻 ,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設標準 管 8 管 ,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻後用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反複作對倍稀釋 ,從第七 管 中吸出 500ul 棄去 。第八 管 為空白對照 。
3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例 : 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水) 。
4. 洗滌液 :用重蒸水 1:20 稀釋(示例 :1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
檢測程序 :
1. 加樣 :每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻後置 37 ℃ 120 分鍾 。
2. 洗板 :用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次 ,向濾紙上印幹 。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻後置 37 ℃ 6 0 分鍾 。
4. 洗板 :同前 。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鍾 。
6. 洗板 :同前 。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 ℃ 暗處反應15 分鍾 。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻 。
9. 30分鍾內用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值 。
性能 :
1. 準確性 :標準品線性回歸與預期濃度相關係數R值 ,大於等於0.9900 。
2. 靈敏度 :檢測濃度小於0.1 U/mL。
3. 特異性 :不與其它可溶性結構類似物交叉反應 。
4. 重複性 :板內 、板間變異係數均小於15% 。
5. 貯藏 :2-8℃ ,避光防潮保存 。
6. 有效期 :6個月