操作步驟 ：

1）運用前 ，將所有試劑充沛混勻 。不要使液體發生很多的泡沫 ，防止加樣時參加很多的氣泡 ，發生加樣上的差錯 。

2）依據待測樣品數量加上規範品的數量決議所需的板條數 。每個規範品和空白孔主張做複孔 。每個樣品依據自個的數量來定 ，能運用複孔的盡量做複孔 。標本用標本稀釋液1 ：1稀釋後參加50ul於反響孔內 。

3）參加稀釋好後的規範品50ul於反響孔 、參加待測樣品50ul於反響孔內 。當即參加50ul的標記的抗體 。蓋上膜板 ，悄悄振動混勻 ，37℃溫育1小時 。

4）甩去孔內液體 ，每孔加滿洗刷液 ，振動30秒 ，甩去洗刷液 ，用吸水紙拍幹 。重複此操作3次 。假如用洗板機洗刷 ，洗刷次數添加一次 。

5）每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP ，悄悄振動混勻 ，37℃溫育30分鍾 。

6）甩去孔內液體 ，每孔加滿洗刷液 ，振動30秒 ，甩去洗刷液 ，用吸水紙拍幹 。重複此操作3次 。假如用洗板機洗刷 ，洗刷次數添加一次 。

7）每孔參加底物A 、B各50ul ，悄悄振動混勻 ，37℃溫育10分鍾 。防止光照 。

8）取出酶標板 ，敏捷參加50ul停止液，參加停止液後應當即測定成果 。

9）在450nm波利益測定各孔的OD值 。

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