产品列表PROUCTS LIST
新闻动态NEWS
米氏旋毛虫探针法荧光PCR检测试剂盒样品RNA的抽提
点击次数：622 更新时间 ：2022-04-26
样品RNA的抽提 ：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解 。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60% 。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块 。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制） ，清洗RNA沉淀。混匀后 ，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液 ，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟 。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后 ，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值 ，测定RNA溶液 浓度和纯度 。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml 。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为 ：A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。