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​人晚期糖基化終末產物(AGEs)ELISA檢測試劑盒注意事項
點擊次數 :459 更新時間 :2022-04-20

注意事項如下 : 


     1. 正式試驗時 ,應分別以陽性對照與陰性對照控製試驗條件 ,待檢樣品應作一式二份 ,以保證實驗結果的準確性 。有時本底較高 ,說明有非特異性反應 ,可采用羊血清 、兔血清或BSA等封閉 。 


     2. 在ELISA中 ,進行各項實驗條件的選擇是很重要的 ,其中包括: 


     (1) 固相載體的選擇 :許多物質可作為固相載體 ,如聚氯乙烯 、聚苯乙烯 、聚丙酰胺和纖維素等 。其形式可以是凹孔平板 、試管 、珠粒等 。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板 。不管何種載體 ,在使用前均可進行篩選 :用等量抗原包被 ,在同一實驗條件下進行反應 ,觀察其顯色反應是否均一性 ,據此判明其吸附性能是否良好 。 


     (2) 包被抗體(或抗原)的選擇 :將抗體(或抗原)吸附在固相載體表麵時 ,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間 。吸附溫度 ,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時 。蛋白質包被適濃度需進行滴定 :即用不同的蛋白質濃度(0.1 、1.0和10μg/ml等)進行包被後 ,在其它試驗條件相同時 ,觀察陽性標本的OD值 。選擇OD值而蛋白量少的濃度 。對於多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml 。 


     (3) 酶標記抗體工作濃度的選擇 :首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份) 。然後再固定其它條件或采取“方陣法"(包被物 、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗係統裏準確地滴定其工作濃度 。 


     (4) 酶的底物及供氫體的選擇 :對供氫體的選擇要求是價廉 、安全 、有明顯地顯色反應 ,而本身無色 。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用 ,應注意防護 。有條件者應使用不致癌 、靈敏度高的供氫體 ,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體 。底物作用一段時間後 ,應加入強酸或強堿以終止反應 。通常底物作用時間,以10-30分鍾為宜 。底物使用液必須新鮮配製 ,尤其是H2O2在臨用前加入  。


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