老哥俱乐部

细胞简介：

骨膜是覆盖在骨质表面的一层结缔组织。骨膜通过夏皮式纤维锚定在骨质上，充当外部肌肉组织和内部骨质的连接桥梁
，这种结构有助于维持骨膜的完整性
。

骨膜由两部分组成
，外层疏松的纤维层与内层致密的细胞层，纤维层中含有成纤维细胞、胶原纤维
、弹力纤维及微管等。细胞层中多为骨膜源干细胞
，这种干细胞与骨髓来源的间充质干细胞类似
，具有多向分化的潜能。

骨质修复
、重塑和更新与骨膜中的干细胞密切相关
。在正常生理状况下，骨膜组织发挥着维持骨质更新及重塑的作用，其中的干细胞既可以通过膜内成骨方式分化为成骨细胞
，也可通过软骨内成骨方式分化为软骨细胞
。

细胞特性
：

1） 细胞来源于实验动物正常关节骨膜组织。

2) 细胞鉴定：CD90或CD73荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV
、HCV
、支原体、、酵母和。

5) 细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 delf原代 上皮 细胞培养体系 作为该细胞的培养试剂。

实验报告：

一、分离与培养

：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2

、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

大鼠肝素(HS)检测试剂盒 
，英文名： HS ELISA Kit

Mouse islet cell aibody (ICA) ELISA Kit 小鼠胰岛细胞抗体(ICA)检测试剂盒

Ratheatshockprotein60,hSP-60ELISAKit 大鼠热休克蛋白60(Hsp-60)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforG-CSFELISAKit大鼠粒细胞集落刺激因子

细胞谷草酰乙酸转氨酶(GOT)活性光谱法定量检测试剂盒20次

Raetinol-bindingprotein,RBPELISAKit大鼠结合蛋白(RBP)检测试剂盒规格

：96T/48T

FCGR2A重组食蟹猴 CD32a / FCGR2A 蛋白 Protein

MrpL28 (mitochondrial ribosomal protein L28 0.5mgMrpL28 (mitochondrial ribosomal protein L28) 线粒体核糖体蛋白L28(抗原)

BLMH重组人 BLMH / BLM hydrolase 蛋白 Protein

EPDR1 Protein Human 重组人 EPDR1 蛋白

TF Protein Mouse 重组小鼠 Transferrin / CD176 / Serotransferrin 蛋白 (Fc 标签)

MrpL28 (mitochondrial ribosomal protein L28 0.5mgMrpL28 (mitochondrial ribosomal protein L28) 线粒体核糖体蛋白L28(抗原)

EPDR1 Protein Human 重组人 EPDR1 蛋白

FCGR2A重组食蟹猴 CD32a / FCGR2A 蛋白 Protein

TF Protein Mouse 重组小鼠 Transferrin / CD176 / Serotransferrin 蛋白 (Fc 标签)

BLMH重组人 BLMH / BLM hydrolase 蛋白 Protein

小鼠基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human Salmonella typhi aigen (St-Ag) ELISA Kit 人伤寒抗原(St-Ag)检测试剂盒

Humanlatemembraneprotein-1,LMP-1ELISAKit 人潜伏膜蛋白1(LMP-1)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-glycoproteinaibody,GP检测试剂盒人抗糖蛋白抗体(GP)检测试剂盒规格：96T/48T

植物亮(leucine)含量比色法定量检测试剂盒20次

HumanvisfatinELISAKit人内脂素/内脏脂肪素(visfatin)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠骨膜干细胞小鼠脱氢酶E1(PDHE1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠CXC趋化因子配体16(CXCL16)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠高敏状腺原酸(u-T3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题


，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。