老哥俱乐部

细胞简介

：

颈位于下部，近似圆锥体，长 2.5～3cm，上端与体相连
，下端深入。宫颈的大小与宫体比例随年龄及状态等而变化。

宫颈壁由黏膜、肌层和外膜组成。其中
，粘膜层主要是由粘膜上皮细胞构成。

细胞特性
：

1） 细胞来源于实验动物的正常组织。

2) 细胞鉴定：PCK荧光染色为阳性
。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%
。

4) 不含有 HIV-1、 HBV
、HCV、支原体、、酵母和。

5) 细胞生长方式

：铺路石样，多角形细胞
，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 delf原代 上皮 细胞培养体系 作为该细胞的培养试剂

。

实验报告
：

一


、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min

，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5

、差速贴壁1h后

，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠叉头框蛋白P3(FoxP3)检测试剂盒 
，英文名： FoxP3 ELISA Kit

Mouse L phenylalanine ammonia lyase (PAL) ELISA Kit 小鼠L苯解氨酶(PAL)检测试剂盒

ELISA 小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mouse GM-CSF)  进口分装

CLIAKitforLDH(HumanLactateDehydrogenase)ELISAKit人乳酸脱氢酶

通用型N-乙酰转移酶(NAT)活性高效液相层析法(HPLC)定量检测试剂盒20次

ELISAKitIFN-γ猴γ干扰素

CDH13重组大鼠 CDH13 / Cadherin-13 / H Cadherin 蛋白 Protein

DAD1 (dopamine D1 receptor 1mgDAD1 (dopamine D1 receptor) 多巴胺受体-D1抗原

IL16重组人 IL16 / Interleukin-16 蛋白 Protein

ENTPD3 Protein Human 重组人 ENTPD3 / NTPDase3 / CD39L3 蛋白

C Protein Mouse 重组小鼠 C / SLAMF2 / BCM1 蛋白

DAD1 (dopamine D1 receptor 1mgDAD1 (dopamine D1 receptor) 多巴胺受体-D1抗原

ENTPD3 Protein Human 重组人 ENTPD3 / NTPDase3 / CD39L3 蛋白

CDH13重组大鼠 CDH13 / Cadherin-13 / H Cadherin 蛋白 Protein

C Protein Mouse 重组小鼠 C / SLAMF2 / BCM1 蛋白

IL16重组人 IL16 / Interleukin-16 蛋白 Protein

小鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat soluble receptor activator of nuclear factor kappa B ligand (sRANKL) ELISA Kit 大鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)检测试剂盒

Humaecombinationactivatinggene1,RAG-1ELISAKit 人重组激活基因1(RAG-1)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-gasicparietalcellaibody,AGPA/PCA检测试剂盒人抗网硬蛋白抗体(ARA)检测试剂盒规格
：96T/48T

植物赖(lysine)含量化学比色法定量检测试剂盒20次

HumanVitaminB6
，VB6ELISAKit人B6(VB6)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠宫颈上皮细胞小鼠补体成分5   英文名称：   Mouse Compleme Compone 5   规格：      英文缩写：   C5

小鼠结缔组织生长因子   英文名称
：   Mouse Connective Tissue Growth Factor   规格
：      英文缩写：   CTGF

小鼠皮质   英文名称：   Mouse Coicosterone   规格：      英文缩写：   CO

小鼠肌酐   英文名称：   Mouse Creatinine   规格
：      英文缩写：   CT

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。