實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃ ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

彈性軟骨僅存在高等動物外耳廓 、聽道 、會咽等處 。與其它軟骨相比 ，間質中含有大量交織成網的彈性纖維 ，成網狀在軟骨內排列 ，同時含有少量膠原纖維 。目前 ，彈性軟骨大多被用於修複人類殘缺及畸形耳廓及其它美容修複 。

細胞特性 ：

1） 組織來源於實驗動物的耳組織 。

2) 細胞鑒定 ：Ⅱ型膠原(Collagen Ⅱ)熒光染色為陽性 。

3) 經鑒定細胞純度高於90% 。

4) 不含有 HIV-1 、 HBV 、HCV 、支原體 、 、酵母和 。

5) 細胞生長方式 ：梭狀 ，不規則細胞 ，貼壁培養

推薦培養基 ：

老哥俱樂部推薦使用 delf原代 上皮 細胞培養體係 作為該細胞的培養試劑 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠異檸檬酸脫氫酶1(IDH1)檢測試劑盒  ，英文名 ： IDH1 ELISA Kit

Mouse leptin receptor (LR/Ob-R) ELISA Kit 小鼠苗條素受體(LR/Ob-R)檢測試劑盒

MouseSolubleClusterofdiffereiation40ligand,sCD40LELISAKit 小鼠可溶性白細胞分化抗原40配體(sCD40L)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumandesmin,DesELISAKit人結蛋白

細胞Akt1/PKBa激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20/50/100

ELISAKitNF-κBp65大鼠核因子-κB亞基p65親和肽

IL25重組大鼠 Interleukin 25 / IL25 / IL17E 蛋白 (Fc 標簽) Protein

ERK(Extracellular signal-regulated kinase 0.5mgERK(Extracellular signal-regulated kinase) 原活化蛋白激酶抗原

FGFR4重組人 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 Protein

ENPP2 Protein Human 重組人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白

CNTNAP2 Protein Mouse 重組小鼠 CNTNAP2 / CASPR2 蛋白

ERK(Extracellular signal-regulated kinase 0.5mgERK(Extracellular signal-regulated kinase) 原活化蛋白激酶抗原

ENPP2 Protein Human 重組人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白

IL25重組大鼠 Interleukin 25 / IL25 / IL17E 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CNTNAP2 Protein Mouse 重組小鼠 CNTNAP2 / CASPR2 蛋白

FGFR4重組人 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 Protein

小鼠甲狀腺球蛋白(TG)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat soluble cell differeiation aigen 14 (sCD14) ELISA Kit 大鼠可溶性白細胞分化抗原14(sCD14)檢測試劑盒

Humaetinoicacidinduciblegene/RIG-likereceptor,RLR-9ELISAKit 人酸誘導基因/RIG-1樣受體(RLR)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-fibrillarinaibody,AFA/snoRNP/U3RNP檢測試劑盒人抗核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

植物精(arginine)含量化學比色法定量檢測試劑盒20次

HumanVitaminD2 ，VD2ELISAKit人2(VD2)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠耳軟骨細胞小鼠垂體腺苷酸環化酶激活肽檢測試劑盒   小鼠垂體腺苷酸環化酶激活肽試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠垂體腺苷酸環化酶激活肽試劑盒，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠垂體腺苷酸環化酶激活肽試劑盒 、小鼠垂體腺苷酸環化酶激活肽eisa試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠超敏C反應蛋白檢測試劑盒   小鼠超敏C反應蛋白試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠超敏C反應蛋白試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠超敏C反應蛋白試劑盒 、小鼠超敏C反應蛋白eisa試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠補體片斷檢測試劑盒   小鼠補體片斷試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠補體片斷試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠補體片斷試劑盒 、小鼠補體片斷eisa試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠補體蛋白檢測試劑盒   小鼠補體蛋白試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠補體蛋白試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠補體蛋白試劑盒、小鼠補體蛋白eisa試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。