老哥俱乐部

细胞简介：

自然杀伤细胞 (natural killer cell，NK)是机体重要的细胞，不仅与抗肿瘤、 抗病毒感染和调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身性的发生
。一种稳定表达在NK和LAK细胞表面的LAK-1分子
，120kDa，NK细胞在IL-2条件下培养20天LAK-1仍为阳性，而HNK-1(CD57）和CD16部分消失。LAK的杀伤活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。

自然杀伤细胞刺激因子（ natural killer cell stimulatory factor,NKSF) 对NK细胞有刺激作用。IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白细胞调节素(leukoregulin,LR) 对NK细胞的活化和分化有正调节作用， 体外培养时加入上述细胞因子可明显提高NK的杀伤活性
。前列腺素 (PG)E1、E2、D2和肾上腺皮质等对NK细胞的活性有抑制作用
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常外周血组织。

2)细胞鉴定
：CD56或CD16荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1

、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。

5)细胞生长方式
：圆形或椭圆形细胞
，不规则细胞
，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代 NK 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3、PBS冲洗细胞2次


，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

人神经调节蛋白1（NRG-1）elisa检测试剂盒

犬B-细胞趋化因子1(BLC-1/CXCL13)elisa检测试剂盒

细胞脊髓过氧化酶（MPO）活性比色法定量检测试剂盒

小鼠角化细胞生长因子(KGF/FGF-7)elisa检测试剂盒

大鼠促甲状腺素(TSH)elisa分析检测试剂盒

Ⅱ(FⅡ)elisa检测试剂盒

大鼠血清素受体2A/5-羟色胺受体2A(5-HT-2A)elisa检测试剂盒

饮料总乳酸比色法定量检测试剂盒

小鼠I型前胶原羧基端肽（PICP）elisa检测试剂盒

锌指蛋白530抗体 ZNF530

锌指蛋白830抗体 ZNF830

层粘蛋白α5抗体 Laminin alpha 5

雌诱导基因121蛋白抗体 EIG121

DPH3蛋白抗体 DPH3

EIF5AL1蛋白抗体 EIF5AL1

磷酸化激酶B(Tyr817)重组兔单克隆抗体 Phospho-TrkB (Tyr817)

磷酸化丝裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗体 Phospho-MAPKAPK2 (Thr222)

组蛋白H3.1抗体 Histone H3.1

11号染色体开放阅读框74抗体 C11orf74

黑色素瘤抗原F蛋白家族1抗体 MAGEF1

环指蛋白14抗体 RNF14

PDHA2蛋白抗体 PDHA2

PerCP-Cy5.5标记人CD81单克隆抗体 human CD81/PerCP-Cy5.5

神经细胞特异性微管蛋白抗体 TUBB3 (Neuronal Marker)

丝/苏蛋白激酶MARK2抗体 MARK2

N-去甲基化酶（AND）测试盒

鸟类催乳素(PRL/LTH)elisa分析检测试剂盒

PRL/LTH ELISA Kit

人白介素2(IL-2)elisa分析检测试剂盒

大鼠NK细胞HumanIL-2ELISAkit

注意事项

：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。