細胞簡介 ：

豬成骨分離自顱骨組織 ；顱骨位於脊柱上方 ，由23塊形狀和大小不同的扁骨和不規則骨組成 。除下頜骨及舌骨外 ，其餘各骨彼此借縫或軟骨牢固連結 ，起著保護和支持腦 、感覺器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用 。顱分腦顱和麵顱兩部分 。腦顱位於顱的後上部 ，內有顱腔 ，容納腦 ，共8塊 。麵顱為顱的前下部分 ，包含眶 、鼻腔 、口腔等結構 ，構成麵部的支架 ，共15塊 。成骨細胞是骨形成的主要功能細胞，負責骨基質的合成 、分泌和礦化 。骨不斷地進行著重建 ，骨重建過程包括破骨細胞貼附在舊骨區域 ，分泌酸性物質溶解礦物質 ，分泌蛋白酶消化骨基質 ，形成骨吸收陷窩 ；其後 ，成骨細胞移行至被吸收部位 ，分泌骨基質 ，骨基質礦化而形成新骨 ；破骨與成骨過程的平衡是維持正常骨量的關鍵 。成骨細胞培養不僅有助於了解骨形成機製 、骨骼係統疾病的分子和細胞學基礎 ，也是藥物篩選 、生物材料開發和生物工程研究的重要手段 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的豬成骨采用先用短時間消化 、後用膠原酶反複消化製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的豬成骨經ALP染色檢測 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形 、多角形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠5-羥色胺轉運體(5-HTT/SE)檢測試劑盒  ，英文名 ： 5-HTT/SE ELISA Kit

Mouse maix metalloproteinase 4 (MMP-4) ELISA Kit 小鼠基質金屬蛋白酶4(MMP-4)檢測試劑盒

Mouseα-glathioneS-ansferases,α-GSTELISAKit 小鼠αS轉移酶(α-GST)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanscavengerreceptorB,SRBELISAKit人清道夫受體B

通用型植物線粒體DNA萃取試劑盒10/20次

ELISAKitGelsolin大鼠凝溶膠蛋白

HA重組甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

PACAP receptor-I 腺苷酸環化酶激活肽受體(抗原 0.5mgPACAP receptor-I 腺苷酸環化酶激活肽受體(抗原)

CSH1重組人 Placental Lactogen / CSH1 蛋白 Protein

EDEM2 Protein Human 重組人 EDEM2 / C20orf31 蛋白

C5 Protein Human 重組人 Complement C5a 蛋白

PACAP receptor-I 腺苷酸環化酶激活肽受體(抗原 0.5mgPACAP receptor-I 腺苷酸環化酶激活肽受體(抗原)

EDEM2 Protein Human 重組人 EDEM2 / C20orf31 蛋白

HA重組甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

C5 Protein Human 重組人 Complement C5a 蛋白

CSH1重組人 Placental Lactogen / CSH1 蛋白 Protein

小鼠巨噬細胞替代激活相關化學因子1(AmAC-1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human lactate dehydrogenase (LDH) ELISA Kit 人乳酸脫氫酶(LDH)檢測試劑盒

HumanOsteogenicGrowthPeptide,OGPELISAKit 人成骨生長肽(OGP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-Bburgdorleriaibody,BB-Ab檢測試劑盒人抗BB抗體(BB-Ab)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

植物過氧化氫(HYDROGENPEROXIDE)活性熒光定量檢測試劑盒20次

Humanα-Synuclein,α-SYNELISAKit人α突觸核蛋白(α-SYN)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

豬成骨細胞小鼠多巴胺D1受體(D1R)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠多巴胺(DA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠對基苯(PABA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠端粒酶(TE)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。