老哥俱乐部

细胞简介
：

小鼠棕色脂肪分离自棕色脂肪组织
；动物体内存在棕色和白色两种脂肪，白色脂肪堆积在皮下，负责储存多余热量
；棕色脂肪负责分解引发肥胖的白色脂肪
，将后者转化成二氧化碳、水和热量，本身不储存热量
。棕色脂肪组织呈棕色
，其特点是组织中有丰富的毛细血管，脂肪细胞内散着许多小脂滴，线粒体大而丰富
，核圆形

，位于细胞中央，这种脂肪细胞也称为多泡脂肪细胞
。棕色脂肪组织在成年动物极少
，新生儿及冬眠动物较多
，在新生儿主要分布在肩胛间区
、腋窝及颈后部等处。棕色脂肪组织仅在婴儿时期发挥作用，它们堆积在新生儿肩胛处

，帮助维持体温
。随着年龄增长，棕色脂肪会逐渐消失
。终，动物体内只残存少量棕色脂肪细胞

，分布于颈部和锁骨。脂肪细胞分为白色脂肪细胞和褐色（棕色）脂肪细胞
，常呈白色
，在婴幼儿期大量增殖，到青春期数量达到
，此后数量一般不再增加
。细胞内含有大量富含脂肪的小泡
，称为脂质泡，富含光面内质网。此外

，还有一种褐色脂肪细胞，在动物体内主要存在于肩胛骨间、颈背部
、腋窝、纵隔及肾脏周围，含有高度团缩的褐色脂肪，作用是将脂质分解产热，调节体内脂质比例。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠棕色脂肪采用胶原酶消化法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠棕色脂肪经油红O染色检测
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形

、多角形

传代特性 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2，5%

实验报告：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次


，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠0酸烯醇式酸羧激酶1(PCK1)检测试剂盒 ，英文名
： PCK1 ELISA Kit

Mouse hepatitis B virus e aibody (HBeAb) ELISA Kit 小鼠乙型肝e抗体(HBeAb)检测试剂盒

RatHaptoglobin,Hpt/HPELISAKIT 大鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGCELISAKit大鼠内源性糖皮质激素

细胞S转移酶(GSHST)总活性比色法定量检测试剂盒20次

RaeceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKLELISAKit大鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)检测试剂盒规格：96T/48T

NP重组甲型流感 H1N1 (A/California/07/2009) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) Protein

PDGF-R-A 血小板源性生长因子受体-A(抗原 0.5mgPDGF-R-A 血小板源性生长因子受体-A(抗原)

CEACAM8重组人 CEACAM8 / CD66b 蛋白 Protein

FAM171B Protein Human 重组人 FAM171B / KIAA1946 蛋白

CD14 Protein Human 重组人 CD14 蛋白 (Fc 标签)

PDGF-R-A 血小板源性生长因子受体-A(抗原 0.5mgPDGF-R-A 血小板源性生长因子受体-A(抗原)

FAM171B Protein Human 重组人 FAM171B / KIAA1946 蛋白

NP重组甲型流感 H1N1 (A/California/07/2009) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) Protein

CD14 Protein Human 重组人 CD14 蛋白 (Fc 标签)

CEACAM8重组人 CEACAM8 / CD66b 蛋白 Protein

小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human growth regulated oncogene alpha / melanoma growth stimulating factor (GRO alpha/CXCL 人生长调节致癌基因α/黑素瘤生激因子(GROα/CXCL

Humanpyruvatedehydrogenase-E1,PDHE1ELISAKit 人酸脱轻酶E1(PDHE1)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-Qfeveraibody,ai-Q-Ab检测试剂盒人抗Q热抗体(ai-Q-Ab)检测试剂盒规格：96T/48T

植物释放凋亡检测试剂盒(含抗体)10次

Humaumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand3,AIL-R3ELISAKit人坏死因子相关凋亡诱导配体3(AIL-R3)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠棕色脂肪细胞小鼠P物质受体(SP-R)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠P物质(SP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠P53(P53-ab)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠p53(p53)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1

：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。