老哥俱乐部

细胞简介
：

小鼠支气管上皮分离自支气管组织
；支气管（Bronchi）
，是指由气管分出的各级分枝，由气管分出的一级支气管
，即左、右主支气管。左主支气管与右主支气管相比较，前者较细长，走向倾斜
；后者较粗短，走向较前者略直
，所以经气管堕入的异物多进入右主支气管。支气管和气管还有以区别就是，气管是以“C"型的气管软骨为支架，而支气管不是。支气管上皮是气道与外界环境接触的道防线，不仅是各种病原体、炎症介质作用的靶细胞


，还作为效应细胞合成、释放多种炎性介质和细胞因子，从而参与气道炎症及免疫反应。支气管上皮细胞在哮喘、慢性阻塞性肺疾病
、肺癌、肺囊性纤维化以及一些感染性呼吸道疾病的发病机制中均起着重要的作用。体外培养的原代支气管上皮细胞因与体内组织在形态结构和功能活动上存在很大的相似性，因此，在基础及临床研究中极为重要
。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠支气管上皮采用-混合消化法结合机械刮刷并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠支气管上皮经PCK免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS
、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气

，95%；CO2，5%

实验报告

：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定

：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2

、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照

。

公司正在出售的产品：

铁测试盒   Iron test case

锰测试盒   Manganese test case

镍测试盒   Nickel test case

盐快速测试盒   Niate rapid test case

小鼠15-脂氧合酶(15-LOX)试剂盒 96T/48T

Human Pro gasin releasing peptide (ProGRP) ELISA Kit 人胃泌素释放肽前体(ProGRP)试剂盒

HumanPeosidineELISAKit 人戊糖素(Peosidine)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCoxsackievirusIgM,CoxV-IgM试剂盒人柯萨奇病毒IgM(CoxV-IgM)试剂盒规格
：96T/48T

组织CMV(CYTOMEGALOVIRUS)病毒定量PCR扩增试剂盒20次

Humanproteindisulfide-isomeraseA3,PDIA3ELISAKit人蛋白二硫化物异构酶A3(PDIA3)试剂盒规格：96T/48T

CSF2重组大鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 Protein

Defensin Beta1(human 0.5mgDefensin Beta1(human) 防御素β1抗原(人)

S100A3重组人 S100A3 / S100E 蛋白 (His & MBP 标签) Protein

IFNAR1 Protein Human 重组人 IFNAR1 / IFNAR 蛋白

NGF Protein Mouse 重组小鼠 β-NGF / Beta-NGF 蛋白

Defensin Beta1(human 0.5mgDefensin Beta1(human) 防御素β1抗原(人)

IFNAR1 Protein Human 重组人 IFNAR1 / IFNAR 蛋白

CSF2重组大鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 Protein

NGF Protein Mouse 重组小鼠 β-NGF / Beta-NGF 蛋白

S100A3重组人 S100A3 / S100E 蛋白 (His & MBP 标签) Protein

小鼠支气管上皮细胞大鼠雌一醇(E1)试剂盒 ，英文名： E1 ELISA Kit

Mouse 25 hydroxyvitamin D3 (25 (OH) ELISA kit D3/25 HVD3) ELISA Kit 小鼠25羟基3(25(OH)试剂盒D3/25 HVD3)试剂盒

ELISA 小鼠结缔组织生长因子(mouse CTGF)  进口分装

CLIAKitforLHELISAKit大鼠促黄体激素

通用型HHV6-A(HUMANHERPESVIRUS6-A)病毒定性试剂盒20次

ELISAKitADM肾上腺髓质素

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息

，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。