老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠胰岛β分离自胰腺组织
；胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分
。外分泌腺由腺泡和腺管组成

，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、原
、脂肪酶、。胰液通过胰腺管排入十二指肠，有消化蛋白质、脂肪和糖的作用。内分泌腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成，胰岛主要由4种细胞组成：α细胞、β细胞
、γ细胞及PP细胞。α细胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β细胞分泌胰岛素，降低血糖；γ细胞分泌
，以旁分泌的方式抑制α
、β细胞的分泌；PP细胞分泌胰多肽，抑制胃肠运动、胰液分泌和胆囊收缩。胰岛β细胞，即胰岛B细胞
，是胰岛细胞的一种，属内分泌细胞的一种，能分泌胰岛素，与胰岛α细胞分泌的胰高血糖素一起起到调节血糖的作用。胰岛B细胞功能受损、胰岛素分泌绝对或相对不足（胰岛素抵抗），会使血糖升高
，从而引发糖尿病。而胰岛B细胞癌变会生成胰岛素瘤
，引起恶性血糖降低症状
。

方法简介

：

公司实验室分离的小鼠胰岛β采用先用胶原酶消化分离得到胰岛、再用逐级消化胰岛制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠胰岛β经Insulin含量检测，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠天冬酸转酶(AST)检测试剂盒 ，英文名
： AST ELISA Kit

Mouse myelin basic protein (MBP) ELISA Kit 小鼠髓0脂碱性蛋白(MBP)检测试剂盒

Rati-iodothyronine,T3ELISAKit 大鼠三甲状腺原(T3)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHO-1ELISAKit大鼠血红素氧合酶1

细胞PKCγ激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKi-proBNP大鼠N端前脑素

CD99L2重组小鼠 CD99L2 / MIC2L1 蛋白 (Fc 标签) Protein

Bad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter 0.5mgBad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter) 相关死亡促进因子Bad抗原

SELM重组人 SELM / Selenoprotein M 蛋白 Protein

DUSP3 Protein Human 重组人 DUSP3 / VHR 蛋白 (His & GST 标签)

TNFSF8 Protein Rat 重组大鼠 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (Fc 标签)

Bad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter 0.5mgBad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter) 相关死亡促进因子Bad抗原

DUSP3 Protein Human 重组人 DUSP3 / VHR 蛋白 (His & GST 标签)

CD99L2重组小鼠 CD99L2 / MIC2L1 蛋白 (Fc 标签) Protein

TNFSF8 Protein Rat 重组大鼠 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (Fc 标签)

SELM重组人 SELM / Selenoprotein M 蛋白 Protein

小鼠抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)ELISA 试剂盒 96T/48T

Ai endothelial cell aibodies (AECA) in rat ELISA Kit 大鼠抗内皮细胞抗体(AECA)检测试剂盒

HumanflagellinELISAKit 人鞭毛蛋白(flagellin)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAngiotensinⅡReceptor2,AT2R检测试剂盒人血管紧张素Ⅱ受体2(AT2R)检测试剂盒规格：96T/48T

植物甘油-3-0酸脱氢酶(Glycerol-3-PhosphateDehydrogenase)总活性比色法定量检测试剂盒20次

Humanβ-Thromboglobulin,β-TGELISAKit人β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠胰岛β细胞小鼠巯基转移酶（GST）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠过氧化酶（GSH-Px）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠(GSH)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠谷酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代

。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。