實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠嗅球分離自嗅球組織 ；嗅球是脊椎動物前腦結構中參與嗅覺的部分 ，用於感知氣味 。嗅球分為二個不同的結構 ：主嗅球及輔助嗅球 。在大腦額葉來自許多嗅細胞的神經纖維纏集在一起 ，形成線球狀的部分 。在這裏 ，纖維與多個次級神經元——僧帽細胞的樹突相連接 ，進而由這裏伸出神經纖維形成嗅囊 ，終止於額葉下方 。一般認為它在嗅味的辨別中具有重要的功能 。對於大部份的脊椎動物而言 ，嗅球位在大腦的前麵 ，不過人的嗅球位於大腦的內部 。嗅球由篩骨的篩板固定且保護嗅球 ，哺乳動物的篩板會分隔嗅球和嗅上皮 ，而嗅神經會穿過篩板中的篩孔而連接到嗅球 。嗅球分為二個不同的結構 ：主嗅球及輔助嗅球 。

方法簡介 ：

實驗室分離的小鼠嗅球采用消化法結合神經元專用培養基培養 、化學試劑抑製法篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的小鼠嗅球經MAP-2免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 ：PLL（0.1mg/ml）

培養基 ：含B-27 Supplement 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2天半量換液1次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：神經元細胞樣

傳代特性 ：不傳代 ，不增殖 ，存活1-2周

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

小鼠嗅球體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠細胞外信號調節激酶2(ERK2)檢測試劑盒  ，英文名 ： ERK2 ELISA Kit

Mouse nerve growth guidance factor Slit2 ELISA Kit 小鼠神經生長導向因子Slit2 檢測試劑盒

MouseCollageypeⅡ,ColⅡELISAKit 小鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HSV-IIgG單皰疹Ⅰ型病毒IgG(間接法二步法)

細胞ITK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-3大鼠白介素3

SERPINB6B重組小鼠 Serpinb6b 蛋白 Protein

白介素12受體β2(IL2Rβ2)重組蛋白 Recombinant Interleukin 12 Receptor Beta 2 (IL12Rb2)

SAE1重組人 SAE1 蛋白 Protein

DPP10 Protein Human 重組人 DPP10 / DPRP3 蛋白

TNFSF4 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 OX-40L / TNFSF4 蛋白 (Fc 標簽)

N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)重組蛋白 Recombinant N-Acetyl Beta-D-Glucosaminidase (NAGase)

DPP10 Protein Human 重組人 DPP10 / DPRP3 蛋白

F9重組小鼠 Coagulation Factor IX / FIX / F9 蛋白 Protein

TNFRSF21 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 TNFRSF21 / DR6 蛋白

PTH重組人 PTH / PTH1 / Parathyroid Hormone 蛋白 (Fc 標簽) Protein

小鼠抗線粒體抗體M2亞型(AMA-M2)檢測試劑盒 96T/48T

Human aldosterone (ALD) ELISA Kit 人固酮(ALD)檢測試劑盒

Humanisletamyloidpolypeptide,IAPPELISAKit 人胰島澱粉樣多肽(IAPP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAndrogenBindingProtein,ABP檢測試劑盒人雄激素結合蛋白(ABP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

植物二酚氧化酶(diphenolase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISAKit猴載脂蛋白B100(apo-B100)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠嗅球細胞小鼠骨鈣素   英文名稱 ：   Osteocalcin   規格 ：      英文縮寫 ：   OC

小鼠抑瘤素   英文名稱 ：    M   規格 ：      英文縮寫：   OSM

小鼠催產素   英文名稱 ：   Oxytocin   規格 ：      英文縮寫 ：   OT

小鼠骨保護素配體   英文名稱 ：   Osteoprotegerin ligand   規格 ：      英文縮寫 ：   OPGL