老哥俱乐部

细胞简介
：

小鼠小肠黏膜上皮分离自小肠组织
；小肠位于腹中，上端接幽门与胃相通
，下端通过阑门与大肠相连
，是食物消化吸收的主要场所。小肠盘曲于腹腔内，上连胃幽门，下接盲肠，分为十二指肠
、空肠和回肠三部分
。小肠内消化是至关重要的
，因为食物经过小肠内胰液、胆汁和小肠液的化学性消化及小肠运动的机械性消化后，基本上完成了消化过程
，同时营养物质被小肠粘膜吸收了。小肠管壁由粘膜、粘膜下层、肌层和浆膜构成
。其结构特点是管壁有环形皱襞，粘膜有许多绒毛，绒毛根部的上皮下陷至固有层，形成管状的肠腺，其开口位于绒毛根部之间

。绒毛和肠腺与小肠的消化和吸收功能关系密切
；构成肠腺的细胞有柱状细胞
、杯状细胞、潘氏细胞和未分化细胞。柱状细胞和内分泌细胞与绒毛上皮相似
，接近绒毛的柱状细胞与吸收细胞相似，绒毛深部的柱状细胞微绒毛少而短，不形成纹状缘。小肠有三种功能即消化、吸收和分泌及运动功能

，其中以吸收和分泌功能为主
。平滑肌细胞的收缩是负责肠蠕动的动力
，促使食物向下运动。肠黏膜上皮细胞是机体内外环境的重要屏障，持续暴露于大量抗原中，也是机体面对病原微生物的道防线

。因此，肠黏膜上皮细胞除有吸收、分泌和转运等重要生理功能之外，在黏膜先天性和获得性免疫防御机制中也起着重要作用
。肠黏膜上皮细胞作为先接触抗原的细胞，在黏膜免疫反应的起始阶段发挥关键作用
，它决定黏膜免疫反应的发生、性质和强度
。

方法简介
：

公司实验室分离的小鼠小肠黏膜上皮采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠小肠黏膜上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液

，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次

，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

a10(MAPK10)检测试剂盒 ，英文名
： MAPK10 ELISA Kit

Mouse omein ELISA Kit (omein) 小鼠网膜素(omein)检测试剂盒

Ratesogen,EELISAKit 大鼠雌激素(E)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHGV-IgM(HumanHepatitisGvirusIgG)ELISAKit人庚型肝病毒IgM

细胞SGK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitPCⅠ大鼠Ⅰ型前胶原

SERPINE1重组大鼠 SerpinE1 / PAI-1 蛋白 (Fc 标签) Protein

CRP (C-reactive protin 0.5mgCRP (C-reactive protin) C-反应蛋白(抗原)

IGFBP7重组人 IGFBP7 / IBP-7 蛋白 Protein

DKKL1 Protein Human 重组人 DKKL1 / Soggy-1 / SGY-1 蛋白 (Fc 标签)

SERPINA7 Protein Mouse 重组小鼠 SerpinA7 / TBG 蛋白

CRP (C-reactive protin 0.5mgCRP (C-reactive protin) C-反应蛋白(抗原)

DKKL1 Protein Human 重组人 DKKL1 / Soggy-1 / SGY-1 蛋白 (Fc 标签)

SERPINE1重组大鼠 SerpinE1 / PAI-1 蛋白 (Fc 标签) Protein

SERPINA7 Protein Mouse 重组小鼠 SerpinA7 / TBG 蛋白

IGFBP7重组人 IGFBP7 / IBP-7 蛋白 Protein

小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat ai IgE receptor aibody ELISA Kit 大鼠抗IgE受体抗体检测试剂盒

Humanfetalhemoglobin,HBFELISAKit 人胎儿血红蛋白(HBF)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanalpha-fetoproteinLensculinarisaggliin2,AFP-L2检测试剂盒人小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)检测试剂盒规格：96T/48T

植物氨含量荧光定量检测试剂盒20次

Mouse16-αHydroxyesogen1,16-αOHE-1ELISAKit小鼠16α羟基雌同1(16-αOHE-1)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠小肠黏膜上皮细胞小鼠琥珀酸脱氢酶检测试剂盒   小鼠琥珀酸脱氢酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠琥珀酸脱氢酶试剂盒，规格型号
：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名

：小鼠琥珀酸脱氢酶试剂盒、小鼠琥珀酸脱氢酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

大鼠Ⅷ相关抗原检测试剂盒   大鼠Ⅷ相关抗原试剂盒   规格型号：96T/48T   大鼠Ⅷ相关抗原试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠Ⅷ相关抗原试剂盒
、大鼠Ⅷ相关抗原eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

大鼠抗复合物检测试剂盒   大鼠抗复合物试剂盒   规格型号

：96T/48T   大鼠抗复合物试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：大鼠抗复合物试剂盒
、大鼠抗复合物eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

大鼠型纤溶酶原激活物受体检测试剂盒   大鼠型纤溶酶原激活物受体试剂盒   规格型号：96T/48T   大鼠型纤溶酶原激活物受体试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠型纤溶酶原激活物受体试剂盒
、大鼠型纤溶酶原激活物受体eisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿。