實驗報告：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠腎上腺皮質分離自腎上腺組織 ；腎上腺是人體相當重要的內分泌器官 ，由於位於兩側腎髒的上方 ，故名腎上腺 。腎上腺左右各一 ，位於腎的上方 ，共同為腎筋膜和脂肪組織所包裹 。左腎上腺呈半月形 ，右腎上腺為三角形 。從側麵觀察 ，腺體分腎上腺皮質和腎上腺髓質兩部分 ，周圍部分是皮質 ，內部是髓質 。腎上腺內部是髓質部分 ，分泌腎上腺素和 。這些激素在應激狀態釋放增多 ，能夠幫助升高血壓 ，加快心率 ，升高血糖 ，動員全身的儲備物質 ，為機體與外界環境的抗爭作好充分準備 。腎上腺外部是皮質部分 ，分泌醛固酮 、和少量的雌雄激素 。醛固酮能夠促進小便中尿鉀的排出和尿鈉的重吸收 ，正常數量的醛固酮 ，對維持人體正常血壓有重要作用 。但是如果過多分泌 ，會導致高血壓和低血鉀 。是人體必需的激素之一 。當人體處於應激狀態時 ，比如感冒 ，發燒 ，遇到突發事件的時候 ，腎上腺皮質分泌大量的 ，這些能夠動員機體的存儲能源 ，為應對內部或者外部重要事件提供充分的物質準備 。當缺乏時 ，機體在遇到重大事件的時候 ，往往缺乏足夠應對能力 ，容易被病毒或外界壓力所擊倒 。腎上腺產生的雄激素 ，對男性來講 ，並非 ，但是對女性而言 ，是雄激素的一個重要來源 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠腎上腺皮質采用膠原酶消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠腎上腺皮質經3β-HSD免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形 、多角形

傳代特性 可傳1-2代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

小鼠抑製素B(INH-B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠促甲狀腺素釋放激素(H)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠促上皮質激素釋放激素(CRH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血清總補體(CH50)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat dopamine D2 receptor (D2R) ELISA Kit 大鼠多巴胺D2受體(D2R)試劑盒

Humanβmannosidase,βManaseELISAKit 人β甘露糖苷酶(βManase)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor(CTX-I)ELISAKit大鼠Ⅰ型膠原C端肽

熒光或共聚焦顯微鏡製片封片處理液(熒光穩定 、保存)5/20毫升

MouseIerleukin18,IL-18ELISAKit小鼠白介素18(IL-18)試劑盒規格 ：96T/48T

CD38重組大鼠 SCARB3 蛋白 Protein

ErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3 0.5mgErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3) 表皮生長因子受體3(抗原)

RSPO3重組人 RSPO3 / R-spondin 3 蛋白 (aa 1-146, His 標簽) Protein

CD38 Protein Human 重組人 SCARB3 蛋白 (His & FLAG 標簽)

CES2 Protein Mouse 重組小鼠 CES2 / Carboxylesterase-2 蛋白

ErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3 0.5mgErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3) 表皮生長因子受體3(抗原)

CD38 Protein Human 重組人 SCARB3 蛋白 (His & FLAG 標簽)

CD38重組大鼠 SCARB3 蛋白 Protein

CES2 Protein Mouse 重組小鼠 CES2 / Carboxylesterase-2 蛋白

RSPO3重組人 RSPO3 / R-spondin 3 蛋白 (aa 1-146, His 標簽) Protein

小鼠腎上腺皮質細胞大鼠法尼醇X受體(FXR)試劑盒  ，英文名 ： FXR ELISA Kit

Porcine endothelin 1 (ET-1) ELISA Kit 豬內皮素1(ET-1)試劑盒

鴨特定基因序列(Duck)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforM-AChRELISAKit大鼠受體

體液遊離氨基酸含量熒光定量試劑盒20次

ELISAKitTGF-β1雞轉化生長因子β1