實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠前列腺基質分離自前列腺組織 ；前列腺（Prostate）是雄性的性腺器官 ；前列腺是不成對的實質性器宮 ，由腺組織和肌組織構成 。前列腺如栗子 ，底朝上 ，與膀胱相貼 ，尖朝下 ，抵泌尿生殖膈 ，前麵貼恥骨聯合 ，後麵依直腸 。前列腺腺體的中間有尿道穿過 ，扼守著尿道上口，所以 ，前列腺有問題時 ，排尿先受影響 。前列腺是機體非常少有的 ，具有內 、外雙重分泌功能的性分泌腺 。作為外分泌腺 ，前列腺每天分泌前列腺液 ，是構成精液主要成分 ；作為內分泌腺 ，前列腺分泌的激素稱為“前列腺素" 。常見疾病為良性前列腺增生 ，在病理學上良性前列腺增生症又稱前列腺結節狀增生 ，是前列腺中常見的產生症狀的瘤樣病變 ，結節開始發生可能是基質細胞自發逆轉至胚胎階段 ，其生長潛力可能是基質-上皮之間的相互協同作用所致 ，終形成前列腺增生 。基質細胞是器官中結締組織細胞 ，起到為器官中實質細胞提供支持和營養的作用 ，成纖維細胞 、炎症細胞 、免疫細胞以及周皮細胞都是常見的基質細胞類型 。基質細胞和腫瘤細胞的相互作用在腫瘤細胞的生長過程中具有重要作用 。體外培養前列腺基質細胞對治療前列腺增生有重要的研究意義 。

方法簡介 ：

實驗室分離的小鼠前列腺基質采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的小鼠前列腺基質經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳2-3代左右

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

小鼠前列腺基質體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠補體C3a(C3a)檢測試劑盒  ，英文名 ： C3a ELISA Kit

Mouse plasmin inhibitor, alpha 2 (2-PI) ELISA Kit 小鼠α2纖溶酶抑製物(α2-PI)檢測試劑盒

ELISA 小鼠紅細胞生成素受體(mouse EPOR)  進口分裝

CLIAKitforKLK6(HumanKallikrein6)ELISAKit人6

通用型產氣莢膜梭茵(Closidiumperfringens)試劑盒20次

ELISAKitcath-K大鼠組織蛋白酶K

CADM3重組大鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 蛋白 Protein

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CXCL5 Protein Human 重組人 CXCL5 蛋白

UCHL3 Protein Mouse 重組小鼠 UCHL3 / UCH-L3 蛋白

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小鼠0脂酶A2(PLA-2)檢測試劑盒 96T/48T

Human common ace lymphocytic leukemia aigen (CALLA) ELISA Kit 人普通急性淋巴細胞白血病抗原(CALLA)檢測試劑盒

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脂質過氧化物異構前列腺素(ISOPROSTANE)ELISA定量測定試劑盒48/96次

Mouseamyloidbetapeptide1-40,Aβ1-40ELISAKit小鼠β澱粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

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