實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠破骨分離自骨組織和骨髓 ；破骨細胞是骨組織中的多核巨細胞 ，位於骨組織表麵的淺凹處 。目前一般認為破骨細胞是分離自骨骼外的造血係統 ，其前體可能屬於造血幹細胞的前單核細胞 。破骨細胞的主要功能是維持骨吸收和骨形成的相對平衡 ，若失去這種平衡則發生病理性變化 。因此多數學者從破骨細胞著手研究破骨細胞的結構 、功能探討骨吸收，形成相互平衡的機製 。但破骨細胞是一種終末分化細胞 ，屬於不增殖細胞群 ，不能增殖和傳代 ，隻能進行原代培養且存活時間較短 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠破骨采用機械分離法/密度梯度離心法和骨髓單核細胞誘導法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠破骨經TRAP染色檢測 ，純度可達30%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 多核巨細胞

傳代特性 屬於終末分化細胞 ；屬於不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

血清遊離（FC）含量測定試劑盒   可見分光光度法   50管/48樣

乙酰酯酶（AchE）試劑盒   可見分光光度法   50管/48樣

組織及血液酸性0酸酶（ACP）試劑盒   可見分光光度法   50管/24樣

組織及血液堿性0酸酶（AKP/ALP）試劑盒   可見分光光度法   50管/24樣

小鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai scleroderma aibody 70 (SCL70/topo 1) ELISA Kit 人抗硬皮病抗體70(SCL70/topoⅠ)試劑盒

Humahymus-dependeaigen,TD-AgELISAKit 人依賴性抗原(TD-Ag)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforAAA(HumanAi-adrenocoicalaibody)ELISAKit人抗腎上腺皮質抗體

胰島素細胞脂肪誘導生成比色法定量試劑盒20次

MouseNeuroglobin,NGBELISAKit小鼠腦紅蛋白(NGB)試劑盒

NTRK1重組大鼠 TrkA / NTRK1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

DR3/TRAMP (death receptor-3 0.5mgDR3/TRAMP (death receptor-3) DR3 死亡受體(抗原)

CTNNB1重組人 beta-Catenin / CTNNB1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

CCL15 Protein Human 重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 46-113, His 標簽)

CD36 Protein Mouse 重組小鼠 CD36 / SCARB3 蛋白

DR3/TRAMP (death receptor-3 0.5mgDR3/TRAMP (death receptor-3) DR3 死亡受體(抗原)

CCL15 Protein Human 重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 46-113, His 標簽)

NTRK1重組大鼠 TrkA / NTRK1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CD36 Protein Mouse 重組小鼠 CD36 / SCARB3 蛋白

CTNNB1重組人 beta-Catenin / CTNNB1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

小鼠破骨細胞大鼠鈣激活1(CAPN1)試劑盒  ，英文名 ： CAPN1 ELISA Kit

Porcine telomerase (TE) ELISA Kit 豬端粒酶(TE)試劑盒

轉基因植物TE基因核酸試劑盒 48T

CLIAKitforMCAb(Mousemelanocyteaibody)ELISAKit小鼠黑色素細胞抗體

體液血管緊張素Ⅰ轉化酶1(ACE1)活性熒光共振能量轉移法(FRET)定量試劑盒20次

ELISAKitIgE馬免疫球蛋白E