實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠精原幹分離自睾丸組織 ；精原幹細胞是位於睾丸生精小管的生精上皮內的一群生精幹細胞 ，是成體內的定向幹細胞 。精原幹細胞的一些優勢使其成為動物轉基因的理想宿主細胞 。精原幹細胞的生理生化特性及其分裂增殖 、分化等多項生命活動的調節機製的深入研究 ，精子發生機理的進一步闡明以及精原幹細胞轉染 ，異體 、異種移植技術的實際應用 ，都迫切需要找到一種可行的方法將其分離純化 ，以期得到較高產量和純度的有活力的精原細胞用於體外培養 。在哺乳動睾丸內 ，精子發生時一個受高度調控和持續的過程 ，精原幹細胞（SSCs）一方麵進行自我更新維持幹細胞數量 ，另一方麵又不斷執行分化成各級生精細胞直至後生成精子 。精原幹細胞定居在曲精細管上皮的基膜處 ，是哺乳動物精子發生的原始細胞，也是動物體內一起能將遺傳信息傳遞的幹細胞 。精原幹細胞體外培養體係的建立 ，在生物學 、醫學 、畜牧業生產及製備轉基因動物等領域具有廣闊的應用前景 。精原幹細胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的一群細胞 ，具有自我更新能力和多向分化潛能 ，是哺乳動物體內能將遺傳信息傳遞給下一代的成體幹細胞 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠精原幹采用先機械吹打 、後消化 ，結合Percoll密度梯度離心法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠精原幹經CD44免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態 球形

傳代特性 可傳2-3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠白介素15(IL-15)檢測試劑盒  ，英文名 ： IL-15 ELISA Kit

Mouse pyruvate kinase (PK) ELISA Kit 小鼠酸激酶(PK)檢測試劑盒

ELISA 小鼠抑製素B(mouse Inhibin B)  進口分裝

CLIAKitforIL-2R(MouseIerleukin-2receptor)ELISAkit小鼠白介素2受體

通用型離子(K)濃度化學比色法定量檢測試劑盒50次

ELISAKitN-AChR大鼠型乙酰受體

CD47重組大鼠 CD47 蛋白 Protein

FoxP1(Forkhead box P1 0.5mgFoxP1(Forkhead box P1) FoxP1(T細胞轉錄因子)抗原

MICA重組人 MICA 蛋白 Protein

CST9L Protein Human 重組人 CST9L / Testatin 蛋白 (Fc 標簽)

EPHA6 Protein Mouse 重組小鼠 EphA6 / EHK-2 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽)

FoxP1(Forkhead box P1 0.5mgFoxP1(Forkhead box P1) FoxP1(T細胞轉錄因子)抗原

CST9L Protein Human 重組人 CST9L / Testatin 蛋白 (Fc 標簽)

CD47重組大鼠 CD47 蛋白 Protein

EPHA6 Protein Mouse 重組小鼠 EphA6 / EHK-2 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽)

MICA重組人 MICA 蛋白 Protein

小鼠內皮型合成酶(eNOS)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human spleen tyrosine kinase (Syk) ELISA Kit 人脾髒酪激酶(Syk)檢測試劑盒

HumanATP-bindingcassetteanspoerA1,ABCA1ELISAKit 人腺苷三0酸結合 96T/48T 進口分裝

HumanADisiegrinAndMetalloprotease10,ADAM10檢測試劑盒人解整合素樣金屬蛋白酶10(ADAM10)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

正常男性人體肝組織S9組分(5毫克/毫升)500微升

MouseAi-glucoprotein210,GP210ELISAKit小鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠精原幹細胞小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗心肌抗體(AMA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝