實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠呼吸道上皮分離自呼吸道 ；呼吸道是肺呼吸時氣流所經過的通道 ，有肺脊椎動物的呼吸道分上、下兩部 ：鼻 、咽和喉合稱上呼吸道 。氣管及其以後一分再分的管道 ，合稱為下呼吸道 ，或稱為氣管樹 。氣管樹是隨著動物的進化逐漸複雜化的 。整個呼吸道內表麵都分布有分泌液和纖毛（鼻孔 、咽後壁和聲帶黏膜除外） ，它能溫暖（或冷卻） 、濕潤和淨化吸入的空氣 ，對於呼吸器官和機體有著保護作用 。呼吸道以骨或軟骨做支架 ，其內表麵覆蓋著黏膜 ，黏膜內分布著豐富的毛細血管 。呼吸道上皮細胞屬於假複層纖毛柱狀上皮 ，分布於呼吸道的內表麵 ，主要由柱狀 ，杯形 ，梭形和錐形等不同形狀細胞組成 。看上去像複層上皮 ，但實際上所有細胞底部均附於基膜上 ，屬單層上皮 ，故稱假複層柱狀上皮 ，上皮表麵有纖毛 ，杯狀細胞可分泌粘液 ，包裹著大量細菌 ，借助纖毛不斷擺動將其慢慢移動至出消化道 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠呼吸道上皮采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法 ，並通過上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠呼吸道上皮經PCK免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

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ELISA 小鼠血小板生成素(mouse TPO)  進口分裝

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TSPAN7重組人 TALLA-1 / TSPAN7 蛋白 Protein

CSNK2A2 Protein Human 重組人 CSNK2A2 / CK2A2 蛋白 (His & GST 標簽)

IL17A Protein Marmoset 重組絨猴 IL17 / IL17A 蛋白

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CSNK2A2 Protein Human 重組人 CSNK2A2 / CK2A2 蛋白 (His & GST 標簽)

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IL17A Protein Marmoset 重組絨猴 IL17 / IL17A 蛋白

TSPAN7重組人 TALLA-1 / TSPAN7 蛋白 Protein

小鼠型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat thyroid peroxidase (TPO) ELISA Kit 大鼠甲狀腺過氧化物酶(TPO)檢測試劑盒

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