細胞簡介 ：

小鼠海綿體內皮分離自海綿體組織 ；陰莖海綿體是由海綿狀的小梁和腔隙構成的血竇結構 ，它主要包括海綿體內皮細胞 、平滑肌細胞和成纖維細胞3種細胞成分 。其中平滑肌細胞和成纖維細胞鑲嵌於海綿體細胞外基質的膠原中 ，而海綿體內皮細胞則覆蓋於海綿體血竇的腔麵 ，僅占海綿體組織的2.8%。在消化海綿體組織時 ，膠原酶的作用主要是鬆解海綿體內皮細胞與基膜的聯係 ，破壞海綿體內皮細胞間的緊密連接 。如果消化時間延長或膠原酶濃度過大 ，平滑肌細胞和成纖維細胞也將被消化下來 ，從而影響海綿體內皮細胞的純度 。因此 ，比較篩選合適的膠原酶濃度和消化時間是成功分離海綿體內皮細胞的關鍵。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠海綿體內皮采用混合酶消化法結合機械分離法 、並用內皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠海綿體內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠淋巴細胞趨化因子(Lptn)檢測試劑盒  ，英文名： Lptn ELISA Kit

Mouse hepatitis B core aibody (HBcAb) ELISA Kit 小鼠乙型肝核心抗體(HBcAb)檢測試劑盒

RatPerinuclearai-neuophilcytoplasmicaibody,pANCAELISAKit 大鼠抗中性粒細胞核周抗體(pANCA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGATA4ELISAKitmuman人GATA結合蛋白4檢測試劑盒

細胞合成酶活性比色法定量檢測試劑盒20次

RatP-SelectinELISAKit大鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

CLEC1A重組大鼠 CLEC1A / CLEC-1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

GIP (Gastric Inhibitory polypeptide 0.5mgGIP (Gastric Inhibitory polypeptide) 胃泌素抑製肽(抗原)

FCGR3A重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 標簽), Biotinylated Protein

FAM19A2 Protein Human 重組人 FAM19A2 蛋白 (Fc 標簽)

FCGR4 Protein Mouse 重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His & AVI 標簽)

GIP (Gastric Inhibitory polypeptide 0.5mgGIP (Gastric Inhibitory polypeptide) 胃泌素抑製肽(抗原)

FAM19A2 Protein Human 重組人 FAM19A2 蛋白 (Fc 標簽)

CLEC1A重組大鼠 CLEC1A / CLEC-1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

FCGR4 Protein Mouse 重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His & AVI 標簽)

FCGR3A重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 標簽), Biotinylated Protein

小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat Mueller tube inhibitory substance / ai Mueller tube hormone (MIS/AMH) ELISA Kit 大鼠繆勒管抑製物質/抗繆勒管激素(MIS/AMH)檢測試劑盒

HumanC-typenaiureticpeptide,CNPELISAKit 人C型尿肽(CNP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-rabiesvirusaibody,ai-RV檢測試劑盒人抗狂犬病毒抗體(ai-RV)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

植物氧化酶活性測定試劑盒20次

Humaumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand1,AIL-R1ELISAKit人壞死因子相關凋亡誘導配體1(AIL-R1)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠海綿體內皮細胞小鼠P物質檢測試劑盒   小鼠P物質試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠P物質試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠P物質試劑盒 、小鼠P物質eisa試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠p53檢測試劑盒   小鼠p53試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠p53試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠p53試劑盒 、小鼠p53eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠N端前腦素檢測試劑盒   小鼠N端前腦素試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠N端前腦素試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠N端前腦素試劑盒 、小鼠N端前腦素eisa試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠L選擇素檢測試劑盒   小鼠L選擇素試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠L選擇素試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠L選擇素試劑盒 、小鼠L選擇素eisa試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。