細胞簡介 ：

小鼠冠狀動脈成纖維分離自冠狀動脈組織 ；冠狀動脈是供給心髒血液的動脈 ，起於主動脈根部 ，分左右兩支 ，行於心髒表麵 。采用Schlesinger等的分類原則 ，將冠狀動脈的分布分為三型 ：右優勢型 、均衡型 、左優勢型 。左右冠狀動脈是升主動脈的對分支 。左冠狀動脈為一短幹，發自左主動脈竇 ，經肺動脈起始部和左心耳之間 ，沿冠狀溝向左前方行後 ，立即分為前室間支和旋支 。前室間支沿前室間溝下行 ，旋支繞過心尖切跡至心的膈麵與右冠狀動脈的後室間支相吻合 。它是構成冠狀動脈壁的主要細胞成分 ，細胞膜上分布著多種離子通道，如電壓依賴性Na+通道 、多種Ca2+通道和K+通道 ；它們參與了靜息電位的維持與細胞膜電位的複極化 、超極化 ，調節血管平滑肌的收縮及舒張功能 ，此外動脈粥樣硬化的發展也涉及冠狀動脈平滑肌細胞增殖 、炎症及凋亡等 。成纖維細胞功能活動旺盛 ，細胞質嗜弱堿性 ，具明顯的蛋白質合成和分泌活動 ，在一定條件下 ，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化 ；成纖維細胞對不同程度的細胞變性 、壞死和組織缺損的修複有著十分重要的作用 。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形 、折光性良好 ，懸浮於培養基中 。30min細胞貼壁 ，其中部分開始伸出偽足 ，表現為小的突起 ；6h後細胞基本貼壁 ，伸展成梭形 ，胞核清晰 ，分布較均勻 ，散在生長 ，不聚集成團 ；細胞生長迅速 ，5-7天即呈融合狀態 ，細胞排列緊密 ，有的交叉重疊生長 ，平坦 、胞體較大 ，細胞質透明 ，細胞核較大 ，呈橢圓形 ，顏色淡 。細胞融合 ，並彼此連接成網狀 ；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布 。

方法簡介 ：

實驗室分離的小鼠冠狀動脈成纖維采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的小鼠冠狀動脈成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳3代左右

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

小鼠冠狀動脈成纖維體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠三葉因子1(TFF1)檢測試劑盒  ，英文名 ： TFF1 ELISA Kit

Mouse sex hormone binding globulin (SHBG) ELISA Kit 小鼠性激素結合球蛋白(SHBG)檢測試劑盒

RatEndotheliallipase,ELELISAKit 大鼠內皮脂肪酶(EL)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHA(MouseHyaluronicacid)ELISAKit小鼠透明質酸

細胞半胱蛋白酶-8(CASPASE-8)活性熒光定量檢測試劑盒20次

RatVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor2,VEGFR-2/Flk-1ELISAKit大鼠血管內皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

SELE重組小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 蛋白 (Fc 標簽) Protein

環氧化合物水解酶4(EPHX4)重組蛋白 Recombinant Epoxide Hydrolase 4 (EPHX4)

EDEM2重組人 EDEM2 / C20orf31 蛋白 Protein

CSNK2A1 Protein Human 重組人 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白 (GST 標簽)

IL11RA Protein Canine 重組狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 蛋白

環氧化合物水解酶4(EPHX4)重組蛋白 Recombinant Epoxide Hydrolase 4 (EPHX4)

CSNK2A1 Protein Human 重組人 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白 (GST 標簽)

SELE重組小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 蛋白 (Fc 標簽) Protein

IL11RA Protein Canine 重組狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 蛋白

EDEM2重組人 EDEM2 / C20orf31 蛋白 Protein

小鼠尿微量白蛋白(ALB)檢測試劑盒 96T/48T

Rat parathyroid hormone related protein (PTHrP) ELISA Kit 大鼠甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)檢測試劑盒

Humandynorphin,DynELISAKit 人強啡肽(Dyn)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Human25-DihydroxyvitaminD3,HVD3檢測試劑盒人25羥基3(25(OH)D3/25HVD3)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母纖維素酶(cellulase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

MouseApolipoproteinE,Apo-EELISAKit小鼠載脂蛋白E(Apo-E)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠冠狀動脈成纖維細胞小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠活化蛋白C(APC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠(ypsin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。