細胞簡介 ：

小鼠骨髓樹突狀分離自骨髓 ；骨髓是機體的造血組織 ，位於身體的許多骨骼內 。成年動物的骨髓分兩種 ：紅骨髓和黃骨髓 。紅骨髓能製造紅細胞 、血小板和各種白細胞 。血小板有止血作用 ，白細胞能殺滅與抑製各種病原體 ，包括細菌 、病毒等 ；某些淋巴細胞能製造抗體 。因此 ，骨髓不但是造血器官 ，它還是重要的免疫器官 。骨髓是存在於長骨(如肱骨 、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀鬆骨質間的網眼中 ，是一種海綿狀的組織 ，能產生血細胞的骨髓略呈紅色 ，稱為紅骨髓。出生時，紅骨髓充滿全身骨髓腔 ，隨著年齡增大 ，脂肪細胞增多 ，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代 ，後幾乎隻有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓 。骨髓DC細胞是由骨髓單核細胞誘導而成的 ；DC細胞 ，全稱樹突狀細胞(DC) ，是近年來倍受們關注的專職抗原呈遞細胞(APC)，能攝取 、加工及呈遞抗原 ，啟動T細胞介導的免疫反應 。由美國學者Steinman於1973年在淋巴結中發現 ，從脾髒中分離出一類與粒細胞 、巨噬細胞和淋巴細胞形態和功都不同的白細胞 ，因其細胞膜向外伸出 ，形成與神經細胞軸突相似的膜性樹狀突起 ，故而命名為樹突狀細胞 。未成熟DC具有較強的遷移能力 ，成熟DC能有效激活初始型T細胞 ，處於啟動 、調控 、並維持免疫應答的中心環節 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠骨髓DC采用密度梯度離心法分離骨髓單個核細胞 、培養過程添加細胞因子誘導而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠骨髓樹突狀(DC細胞)經CD86免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 半貼半懸浮

細胞形態 樹突狀

傳代特性 屬於高度分化細胞 ；屬於不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s ，置37℃消化10 min後，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠中性粒細胞激活蛋白3(NAP3)檢測試劑盒  ，英文名 ： NAP3 ELISA Kit

Mouse soluble cell differeiation aigen 86 (B7-2/sCD86) ELISA Kit 小鼠可溶性白細胞分化抗原86(B7-2/sCD86)檢測試劑盒

MouseFibronectin,FNELISAKit 小鼠纖連蛋白(FN)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanhypotheticalproteinLOC433328ELISAKit人假定蛋白LOC433328

B12高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitCTGF大鼠結締組織生長因子

CD84重組小鼠 CD84 蛋白 Protein

UL16結合蛋白2(ULBP2)重組蛋白 Recombinant UL16 Binding Brotein 2 (ULBP2)

EPHA3重組人 EphA3 蛋白 Protein

CSNK1A1 Protein Human 重組人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 標簽)

EPCAM Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白 (Fc 標簽)

鈣結合蛋白(CR)重組蛋白 Recombinant Calretinin (CR)

CSNK1A1 Protein Human 重組人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 標簽)

PTPRC重組小鼠 CD45 / PTPRC 蛋白 (aa 453-1152, His & GST 標簽) Protein

IL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白

CRIPT重組人 CRIPT / cysteine-rich PDZ-binding 蛋白 Protein

小鼠Ⅸ(FⅨ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human coagulation factor VIII related aigen (VIII -Ag) ELISA Kit 人Ⅷ相關抗原(Ⅷ-Ag)檢測試劑盒

Humanenkephalin,ENKELISAKit 人腦啡肽(ENK)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Human17-Hydroxycoicosteroids,17-OHCS檢測試劑盒人17羥皮質類固醇(17-OHCS)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母細胞線粒體內膜功能/膜電位測定試劑盒20次

MouseAquaporin1,AQP-1ELISAKit小鼠水通道蛋白1(AQP-1)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠骨髓樹突狀細胞(DC細胞)小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)ElisaKit   ELISA.   96T/48T

小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)ElisaKit   ELISA.   96T/48T

小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血管緊張素轉化酶(ACE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。