實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠肝星形分離自肝髒組織 ；肝髒是身體內以代謝功能為主的一個器官 ，並在身體裏麵起著去氧化 、儲存肝糖 、分泌性蛋白質的合成等作用 ；肝髒也製造消化係統中之膽汁 。肝髒是機體內髒裏大的器官 ，位於機體中的腹部位置，在右側橫隔膜之下 ，位於膽囊之前端且於右邊腎髒的前方 ，胃的上方 。肝髒是機體消化係統中大的消化腺 ，為一紅棕色的V字形器官 。肝髒是尿素合成的主要器官 ，又是新陳代謝的重要器官 。肝髒在機體位置和形態結構 ：肝髒位於右上腹 ，隱藏在右側膈下和肋骨深麵 ，大部分肝為肋弓所複蓋 ，僅在腹上區 、右肋弓間露出並直接接觸腹前壁 ，肝上麵則與膈及腹前壁相接 。肝星形細胞（HSC）又名肝貯脂細胞 、貯存細胞 、竇周細胞 、Ito細胞等，是肝髒細胞外基質的主要來源 。HSC在激活後可進一步轉化為肌成纖維細胞樣細胞 ，各種可導致肝纖維化的因素均將HSC作為終靶細胞 。正常情況下 ，HSC處於靜止狀態 ，當肝髒發生炎症反應或受到機械刺激等損傷時 ，HSC的表型由靜止型轉變為激活型 ，激活的HSC可通過增生和分泌細胞外基質參與肝纖維化的形成及肝內結構的重建 ，此過程也是肝纖維化的中心環節 。肝星形細胞分布於肝髒的Disse間隙內，是合成 、分泌細胞外基質的主要來源 ，在肝纖維化的發生中處於重要地位 。肝星形細胞是肝髒的間充質細胞 ，約占肝髒細胞總數的8%-13% 。作為肝髒合成細胞外基質的主要細胞群 ，肝星形細胞不僅能分泌蛋白多糖 、糖蛋白等細胞外基質成分 ，合成一定量的膠原酶以維持正常的基底膜結構，還能通過其突起的收縮參與肝竇的微循環調節 。此外 ，肝星形細胞能通過合成肝細胞生長因子 、胰島素樣生長因子 、表皮生長因子等促進肝細胞增殖和肝再生 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠肝星形采用混合酶灌流消化 、低速離心 、密度梯度離心製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠肝星狀經α-SMA 、Desmin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

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豬纖溶酶原激活物抑製因子(PAI)ELISA 試劑盒

Human maix metalloproteinase 2/ gelatinase A (MMP-2/Gelatinase A) ELISA Kit 人基質金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)試劑盒

Rabbitadramycin,ADRELISAKit 兔阿(ADR)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforai-CMVIgM(Humanai-cytomegalovirusIgMaibody)ELISAKit人抗巨細胞病毒抗體IgM

血液α-L-岩藻糖苷酶(AFU)熒光定量試劑盒20次

PorcineHeatShockProtein40,HSP-40ELISAKit豬熱休克蛋白40(HSP-40)試劑盒

FCGR4重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His 標簽) Protein

Cdc34 peptide 細胞周期調控因子34抗原 0.5mgCdc34 peptide 細胞周期調控因子34抗原

ADK重組人 ADK 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

BCL6 Protein Human 重組人 BCL6 / B-cell CLL lymphoma 6 蛋白 (aa 1-150, His & Trx 標簽)

SELL Protein Mouse 重組小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 (His & Fc 標簽)

Cdc34 peptide 細胞周期調控因子34抗原 0.5mgCdc34 peptide 細胞周期調控因子34抗原

BCL6 Protein Human 重組人 BCL6 / B-cell CLL lymphoma 6 蛋白 (aa 1-150, His & Trx 標簽)

FCGR4重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His 標簽) Protein

SELL Protein Mouse 重組小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 (His & Fc 標簽)

ADK重組人 ADK 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

小鼠肝星狀細胞大鼠胱天蛋白酶8(Casp-8)試劑盒  ，英文名 ： Casp-8 ELISA Kit

Rabbit major histocompatibility complex class II (MHC II /RLA II) ELISA Kit 兔主要組織相容性複合體Ⅱ類(MHCⅡ/RLAⅡ)試劑盒

人皰疹病毒6型(HHV-6)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMMP-4ELISAKit大鼠基質金屬蛋白酶4

體液基質金屬蛋白酶(MMP-13)活性熒光定量試劑盒20次(10樣本)

ELISAKitDHT犬雙氫睾同