實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠枯否分離自肝髒組織 ；肝髒是身體內以代謝功能為主的一個器官 ，並在身體裏麵起著去氧化 、儲存肝糖 、分泌性蛋白質的合成等作用 ；肝髒也製造消化係統中之膽汁 。肝髒是機體內髒裏大的器官 ，位於機體中的腹部位置 ，在右側橫隔膜之下 ，位於膽囊之前端且於右邊腎髒的前方 ，胃的上方 。肝髒是機體消化係統中大的消化腺 ，為一紅棕色的V字形器官 。肝髒是尿素合成的主要器官 ，又是新陳代謝的重要器官 。肝髒在機體位置和形態結構 ：肝髒位於右上腹 ，隱藏在右側膈下和肋骨深麵 ，大部分肝為肋弓所複蓋 ，僅在腹上區 、右肋弓間露出並直接接觸腹前壁 ，肝上麵則與膈及腹前壁相接 。枯否氏細胞(Kupffer細胞)是肝髒的肝血竇內一些固定於竇壁的巨噬細胞 ，它能吞噬和清除大部分從腸道來的抗原微粒 ，並能吞噬和清除肝血竇中的細菌 、異物和衰老的紅細胞 ，並把血紅蛋白分解成 。此外 ，肝巨噬細胞也有處理抗原 ，誘導T細胞增殖 ，參與免疫調節的作用 。枯否氏細胞和一般巨噬細胞不同 ，枯否氏細胞不具有增加抗原免疫原性的能力 ，相反有消除或減弱抗原性的作用 。枯否氏細胞能吞噬來自血液循環的抗原抗體複合物和其他有害物質 ，以消除這些物質對機體的損害 。枯否細胞功能障礙可導致腸源性內毒素血症 。電鏡下有很多皺褶和微絨毛 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠肝枯否采用混合酶灌流消化 、低速離心 、密度梯度離心 、差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠肝枯否經CD68免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體、細菌 、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形 、巨噬細胞

傳代特性 屬於終末分化細胞 ；屬於不增殖細胞群

消化液 （12mM）

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠脂素1(LPIN1)檢測試劑盒  ，英文名 ： LPIN1 ELISA Kit

Mouse soluble leptin receptor (sLR) ELISA Kit 小鼠可溶性瘦素受體(sLR)檢測試劑盒

MouseGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISAKit 小鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforhumanHMGB-1ELISAKit人高遷移率族蛋白B1ELISAKit

B2高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitGDNF大鼠膠質細胞係來源的神經營養因子

TSPAN1重組人 TSPAN1 蛋白 (aa 110-211, Fc 標簽) Protein

Sox2 胚胎幹細胞關鍵蛋白 0.5mgSox2 胚胎幹細胞關鍵蛋白

EFNB1重組人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

CSF2 Protein Human 重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白

PLAU Protein Human 重組人 Urokinase / PLAU 蛋白

Somatostatin/GRIH 抗原 0.5mgSomatostatin/GRIH 抗原

CSF2 Protein Human 重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白

TMEM25重組人 TMEM25 蛋白 Protein

PIGR Protein Human 重組人 PIGR 蛋白 (365 Ser/Gly, His 標簽)

EFNB2重組人 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

小鼠皮質酮/腎上腺酮(CO)ELISA 試劑盒 96T/48T

Prothrombin fragme F1+2 (F1+2) ELISA Kit 人原片段F1+2(F1+2)檢測試劑盒

HumanCollagenaoaibody,CLAELISAKit 人抗膠原蛋白抗體(CLA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Human1,3-Disphosphoglycerate,1,3-DPG檢測試劑盒人1,3-二0酸甘油酸(1,3-DPG)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母細胞線粒體粗提分離試劑盒10次

MouseAzidothymidine,AZTELISAKit小鼠(AZT)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠肝枯否細胞小鼠類胰島素生長因子結合蛋白-1(mouse IGFBP-1)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠類胰島素生長因子結合蛋白-2(mouse IGBPF-2)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠類胰島素生長因子結合蛋白-3(mouse IGBPF-3)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠IgA(mouse IgA)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝