細胞簡介 ：

小鼠肺微血管內皮分離自肺組織 ；肺是機體的呼吸器官 ，位於胸腔 ，左右各一 ，覆蓋於心之上 。肺有分葉 ，左二右三 ，共五葉 。肺經肺係（指氣管 、支氣管等）與喉 、鼻相連 ，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅 。微血管內皮細胞密切參與包括再生 、發育 、傷口愈合等一係列生理及炎症反應 。細胞呈梭形或多角形 ，形成單層後呈鵝卵石樣或鋪路石樣排列 。肺微血管內皮細胞構成半選擇性屏障 ，該屏障對於肺氣體交換 ，調節液體和可溶物在血液與肺間質之間的流動具有重要意義 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠肺微血管內皮采用組織貼塊法並結合內皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠肺微血管內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

豬白介素2(IL-2)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬白介素1β(IL-1β)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬白介素1α(IL-1α)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬肺表麵活性物質相關蛋白A(SP-A)ELISA 試劑盒

Human a disiegrin and metalloproteinase 8 (ADAM8) ELISA Kit 人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)試劑盒

Porcineniicoxide,NOELISAKit 豬血清(NO)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAlpha2-PI(HumanAlpha2-plasmininhititor)ELISAKit人α2纖溶酶抑製物

血液酪酶(tyrosinase)活性比色法定量試劑盒20次

NudeMouseClaracellprotein,CC16ELISAKit裸鼠克拉拉細胞蛋白(CC16)試劑盒

HA重組甲型流感 H11N9 (A/mallard/Alberta/294/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽) Protein

ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin 0.1mgShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22) 海葵神經毒素(35肽)

S100A9重組人 S100A9 / CAGB / P14 蛋白 Protein

AMTN Protein Human 重組人 AMTN / Amelotin 蛋白

LXN Protein Human 重組人 Latexin / LXN / TCI 蛋白

ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin 0.1mgShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22) 海葵神經毒素(35肽)

AMTN Protein Human 重組人 AMTN / Amelotin 蛋白

HA重組甲型流感 H11N9 (A/mallard/Alberta/294/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽) Protein

LXN Protein Human 重組人 Latexin / LXN / TCI 蛋白

S100A9重組人 S100A9 / CAGB / P14 蛋白 Protein

小鼠肺微血管內皮細胞大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1α(PPARγC1α)試劑盒  ，英文名 ： PPARγC1α ELISA Kit

Rat 6 keto prostaglandin F1a (6-keto-PGF1a) ELISA Kit 大鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)試劑盒

RatAi-glucoprotein210,GP210ELISAKit 大鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforeNOSELISAKit大鼠內皮型合成酶

細胞氯乙酰基轉移酶(CAT)報告基因活性同位素薄層色譜(TLC)試劑盒20次

RatLeptospiraIgG,LepIgGELISAKit大鼠鉤端IgG(LepIgG)試劑盒

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。