細胞簡介 ：

小鼠大隱靜脈內皮分離自大隱靜脈 ；大隱靜脈起於足背靜脈弓內側端 ，經內踝前方 ，沿小腿內側緣伴隱神經上行 ，經股骨內側髁後方 ，進入大腿內側部 ，與股內側皮神經伴行 ，逐漸向前上 ，在恥骨結節外下方穿隱靜脈裂孔 ，匯入股靜脈 ，其匯入點稱為隱股點 。有5條屬支 ：旋髂淺靜脈 、腹壁淺靜脈 、外靜脈 、股內側淺靜脈和股外側淺靜脈 ，它們匯入大隱靜脈的形式多樣 ，相互間吻合豐富 。大隱靜脈曲張行高位結紮時 ，須分別結紮 、切斷各屬支 ，以防複發 。大隱靜脈內皮細胞對維持大隱靜脈動態平衡起著重要作用 。它們合成 、分泌凝血和纖溶係統的激活因子和抑製因子 、影響血小板粘附和聚集的調節因子 ；大隱靜脈內皮細胞還釋放控製細胞增殖和調節血管壁緊張度的分子 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠大隱靜脈內皮采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法 、並通過內皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠大隱靜脈內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

總合成酶（NOS）測試盒[測總NOS（T－NOS）]

（NO）測定試劑盒（微板法）

（NO）測定試劑盒（還原酶法）

ATP酶測試盒（測普通組織勻漿的Na+K+ 、Ca2+Mg2+－ATP酶 ，樣本前處理不需高速離心）

豬組胺(HIS)ELISA 試劑盒

Human lipid peroxide / lactoperoxidase (LPO) ELISA Kit 人過氧化脂質/乳過氧化物酶(LPO)試劑盒

RabbitThrombinactivatablefibrinolysisinhibitor,TAFIELISAKit 兔纖溶抑製因子/激活的纖溶抑製物(TAFI)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforApo-E(MouseApolipoproteinE)ELISAKit小鼠載脂蛋白E

溴脫氧尿核苷(BrdU)溶液(1毫摩爾)1毫升

PorcineMelatonin,MTELISAKit豬褪黑素(MT)試劑盒

IL12A & IL12B重組小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

Lin-28同源物A(LIN28A)重組蛋白 Recombinant Lin-28 Homolog A (LIN28A)

RCN3重組人 RCN3 蛋白 (His 標簽) Protein

C1QBP Protein Human 重組人 HABP1 / C1QBP / GC1QBP 蛋白 (His 標簽)

GPT Protein Rat 重組大鼠 GPT1 / GPT 蛋白 (His 標簽)

癌胚抗原(CEA)重組蛋白 Recombinant Carcinoembryonic Antigen (CEA)

C1QBP Protein Human 重組人 HABP1 / C1QBP / GC1QBP 蛋白 (His 標簽)

BCAM重組小鼠 BCAM 蛋白 (His 標簽) Protein

FGFR1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 FGFR1 / CD331 蛋白 (His 標簽)

GSTZ1重組人 GSTZ1 蛋白 (His 標簽) Protein

小鼠大隱靜脈內皮細胞大鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)試劑盒  ，英文名 ： NF-κB p65 ELISA Kit

Rabbit heat shock protein 40 (HSP-40) ELISA Kit 兔熱休克蛋白40(HSP-40)試劑盒

麻疹病毒(MV)核酸試劑盒(-PCR法) 48T

CLIAKitforMouseBeta-Defensins,Beta-DFELISAKit小鼠β-防禦素

體液肌酸激酶(CK)總活性比色法定量試劑盒25次

ELISAKit1,3-βDglucosidase人1,3-βD葡葡糖苷酶

注意事項：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。