老哥俱乐部

细胞简介：

兔真皮成纤维分离自真皮组织；皮肤组织来源包括头部、脸部
、手、脚、腿、背部、腹部、包皮等体表部位皮肤
，可依据需求选用
；真皮
，位于表皮深层，向下与皮下组织相连，真皮结缔组织的胶原纤维和弹性纤维互相交织在一起，埋于基质内
。其内分布着各种结缔组织细胞和大量的胶原纤维弹性纤维
，使皮肤既有弹性，又有韧性。其由两层组成——乳头层与网状层。真皮的结构组成是胶原蛋白、弹性纤维以及基质

。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形

，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性
，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下
，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的真皮成纤维细胞呈圆形
、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰
，分布较均匀
，散在生长

，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦
、胞体较大
，细胞质透明
，细胞核较大

，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。真皮成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括
：构造和维持组织的正常形态
，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织
。

方法简介：

实验室分离的兔真皮成纤维采用先消化
、后-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来

，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔真皮成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基：含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性
：可传5代左右
；3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件
：气相：空气，95%；CO2，5%

兔真皮成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s

，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定

：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠肌球蛋白重链7(MYH7)检测试剂盒 ，英文名
： MYH7 ELISA Kit

Mouse tissue factor (TF) ELISA Kit 小鼠组织因子(TF)检测试剂盒

RatEsogeeceptor,ERELISAKit 大鼠雌激素受体(ER)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFVII(HumancoagulationfactorVII)ELISAKit人Ⅶ

细胞科萨基病毒B(CoxsackievirusB)定量PCR扩增检测试剂盒20次

RatMelatonin,MT/MLTELISAKit大鼠褪黑素(MT/MLT)检测试剂盒规格
：96T/48T

ART3重组人 ART3 蛋白 Protein

streptomycin/OVA 偶联鸡卵白蛋白 10mgstreptomycin/OVA 偶联鸡卵白蛋白

CD200R1重组人 CD200R1 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

COL6A3 Protein Human 重组人 COL6A3 / Collagen-VI 蛋白

TEK Protein Human 重组人 Tie2 / CD202b 蛋白 (His & Fc 标签)

streptomycin/OVA 偶联鸡卵白蛋白 10mgstreptomycin/OVA 偶联鸡卵白蛋白

COL6A3 Protein Human 重组人 COL6A3 / Collagen-VI 蛋白

ART3重组人 ART3 蛋白 Protein

TEK Protein Human 重组人 Tie2 / CD202b 蛋白 (His & Fc 标签)

CD200R1重组人 CD200R1 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

小鼠神经A(NKA) ELISA 试剂盒 96T/48T

Human membrane protein (poiculin) ELISA Kit 人膜桥蛋白(poiculin)检测试剂盒

HumanAlpha1Aichymoypsin,AACTELISAKit 人α1抗胰(AACT)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

GoatIerleukin4,IL-4检测试剂盒山羊白介素4(IL-4)检测试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母0酸葡萄糖变位酶(phosphoglucomase;PGM)活性光谱法定量检测试剂盒20次

MousecoagulationfactorⅡ,FⅡELISAKit小鼠Ⅱ(FⅡ)检测试剂盒规格：96T/48T

兔真皮成纤维细胞小鼠破骨细胞分化因子(ODF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠Toll样受体9(TLR-9/CD289)ELISAkit   ELISA.   96T/48T

小鼠钩端IgG(LepIgG)ELISAKit   ELISA.   96T

小鼠生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。