老哥俱乐部

细胞简介：

兔脉络膜血管内皮分离自眼球脉络膜组织；脉络膜在视网膜和巩膜之间，含有丰富血管和色素细胞

，对外力冲击的耐受性较视网膜差，当眼球受到从前面来的外力的冲击作用通过玻璃体传到后极部时
，坚硬的巩膜在其外面又有抵抗作用，使脉络膜在内外两种作用夹攻下而发生破裂和出血。脉络膜呈暗褐色
，围绕视神经乳头部有照膜，为青绿色带金属光泽的三角形区
。脉络膜是眼球中膜的后2/3处的薄膜，由纤维组织、小血管和毛细血管组成，软而薄
，棕红色，在巩膜和视网膜之间，续连于睫状体后方。脉络膜的血循环营养视网膜外层，其含有的丰富色素起遮光暗房作用

。主要功能是营养视网膜外层及玻璃体

，并有遮光作用
，使反射的物象清楚
。同时对视觉系统起保护作用，对整个视觉神经有调节作用。续连于睫状体后方，含丰富的血管和色素细胞，有营养和遮光作用。

方法简介：

实验室分离的兔脉络膜血管内皮采用胶原酶-混合消化法并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔脉络膜血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上

，且不含有HIV-1

、HBV、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件：PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基：含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性
：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气

，95%
；CO2
，5%

兔脉络膜血管内皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min


，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA 试剂盒

Human vitamin D2 (VD2) ELISA Kit 人2(VD2)检测试剂盒

HumanpregnancyassociatedplasmaproteinA,PAPP-AELISAKit 人相关血浆蛋白A(PAPP-A)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanchlamydialprotease-likeactivityfactor,CPAF检测试剂盒人衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)检测试剂盒规格
：96T/48T

桌面DNA清除溶液500毫升

Humansecretorycompone,SCELISAKit人分泌成分(SC)检测试剂盒规格
：96T/48T

SPOCK1重组人 SPOCK1 / Testican 1 蛋白 (aa 21-429, His 标签) Protein

SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine 0.5mgSPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine) 富含半胱的酸性分泌蛋白抗原

CD36重组人 CD36 / SCARB3 蛋白 Protein

IL2 Protein Human 重组人 IL2 / Interleukin-2 蛋白 (L35M, L36S, C142A)

RBP4 Protein Human 重组人 RBP4 蛋白

SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine 0.5mgSPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine) 富含半胱的酸性分泌蛋白抗原

IL2 Protein Human 重组人 IL2 / Interleukin-2 蛋白 (L35M, L36S, C142A)

SPOCK1重组人 SPOCK1 / Testican 1 蛋白 (aa 21-429, His 标签) Protein

RBP4 Protein Human 重组人 RBP4 蛋白

CD36重组人 CD36 / SCARB3 蛋白 Protein

豚鼠基质金属蛋白酶9(MMP-9)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat bromodeoxyuridine (BrdU) ELISA Kit 大鼠溴脱氧核苷尿(BrdU)检测试剂盒

HumanPemphigusFoliaceus,PFELISAKit 人落叶型天疱疮抗体(PF)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humancyclicadenosinemonophosphate,cAMP检测试剂盒人环0酸腺苷(cAMP)检测试剂盒规格：96T/48T

组织FES激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanProcalcitonin

，PCTELISAKit人降钙素原(PCT)检测试剂盒规格
：96T/48T

兔脉络膜血管内皮细胞人组织蛋白去乙酰化酶检测试剂盒   人组织蛋白去乙酰化酶试剂盒   规格型号
：96T/48T   人组织蛋白去乙酰化酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：人组织蛋白去乙酰化酶试剂盒、人组织蛋白去乙酰化酶检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期
：6个月
。

人组织蛋白酶抗体检测试剂盒   人组织蛋白酶抗体试剂盒   规格型号：96T/48T   人组织蛋白酶抗体试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：人组织蛋白酶抗体试剂盒
、人组织蛋白酶抗体检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。

人组织蛋白酶K检测试剂盒   人组织蛋白酶K试剂盒   规格型号：96T/48T   人组织蛋白酶K试剂盒，规格型号

：96T/48T
，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名：人组织蛋白酶K试剂盒、人组织蛋白酶K 检测试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

人组织蛋白酶D检测试剂盒   人组织蛋白酶D试剂盒   规格型号
：96T/48T   人组织蛋白酶D试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：人组织蛋白酶D试剂盒
、人组织蛋白酶D 检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况

，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。