老哥俱乐部

细胞简介
：

兔淋巴血管内皮分离自淋巴血管组织；淋巴管由毛细淋巴管汇合而成。其形态结构与静脉相似
，但管径较细
，管壁较薄
，瓣膜较多且发达
，外形呈串珠状
。淋巴管根据其位置分为浅、深二种。它们管位于皮下
，常与浅静脉伴行，收集皮肤和皮下组织的淋巴。深淋巴管与深部血管伴行，收集肌肉和内脏的淋巴。浅、深淋巴管之间有广泛的交通支。淋巴管在向心行程中，通常经过一个或多个淋巴结

，从而把淋巴细胞带入淋巴液。主要功能是滤过淋巴液，产生淋巴细胞和浆细胞，参与机体的免疫反应

。当局部感染时，细菌
、病毒或癌细胞等可沿淋巴管侵入
，引起局部淋巴结肿大。如该淋巴结不能阻止和消灭它们，则病变可沿淋巴管的流注方向扩散和转移
。淋巴管内皮细胞（LEC）是衬覆于淋巴管内表面的一种单层扁平上皮，是构成淋巴管壁的主要结构，参与维持体液平衡，调节淋巴细胞再循环和机体的免疫反应和组织液及蛋白质的运输
，在疾病过程中也起着重要作用
。近年研究表明，LEC还在伤口愈合
、淋巴管水肿和炎症扩散等病理过程中起重要作用，而且与肿瘤转移密切相关
。淋巴管内皮细胞主要功能：①调节体液
、蛋白和组织压力平衡；②为免疫系统的重要组成部分。淋巴管内皮细胞与主要病生理变化：①囊肿型淋巴管瘤；②淋巴管炎；③淋巴结核。

方法简介

：

实验室分离的兔淋巴血管内皮采用-胶原酶联合消化法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶

。

质量检测

实验室分离的兔淋巴血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1

、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件：PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件
：气相：空气，95%；CO2
，5%

兔淋巴血管内皮体外培养周期有限

；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2

、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠颗粒酶M(GZMM)检测试剂盒 

，英文名
： GZMM ELISA Kit

Monkey endotoxin (ET) ELISA Kit内毒素(ET)检测试剂盒

Ratmyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAkit 大鼠髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCAIgG)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFSHPoulyELISAKitFSH禽类酶联免疫检测试剂盒

细胞环氧化酶(CYCLOOXYGENASE)总活性比色法定量检测试剂盒20次

RatplateletmembraneglycoproteinⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢaELISAKit大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)检测试剂盒规格
：96T/48T

AXL重组小鼠 Axl Kinase 蛋白 Protein

cath-B/CB(Cathepsin B 0.5mgcath-B/CB(Cathepsin B) 组织蛋白酶B抗原

BCAM重组人 BCAM 蛋白 Protein

IGSF3 Protein Human 重组人 IGSF3 / EWI-3 蛋白

SPN Protein Rat 重组大鼠 SPN / CD43 / Sialophorin 蛋白 (Fc 标签)

cath-B/CB(Cathepsin B 0.5mgcath-B/CB(Cathepsin B) 组织蛋白酶B抗原

IGSF3 Protein Human 重组人 IGSF3 / EWI-3 蛋白

AXL重组小鼠 Axl Kinase 蛋白 Protein

SPN Protein Rat 重组大鼠 SPN / CD43 / Sialophorin 蛋白 (Fc 标签)

BCAM重组人 BCAM 蛋白 Protein

豚鼠血红蛋白(HB)检测试剂盒 
，英文名： HB ELISA Kit

Human secretory compone (SC) ELISA Kit 人分泌成分(SC)检测试剂盒

rabbittissueinhibitorsofmetalloproteinase1,TIMP-1ELISAKit 兔子基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBcl-2(HumanB-cellleukemia/lymphoma2)ELISAKit人B细胞淋巴瘤因子2

纤维蛋白溶酶原激活剂抑制物(PAI)活性比色法定量检测试剂盒20次

RabbitComplemefragme3a,C3aELISAKit兔子补体片断3a(C3a)检测试剂盒规格：96T/48T

兔淋巴血管内皮细胞嗜肺军团杆菌(LP)核酸检测试剂盒   48T

绿脓杆菌(PA)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

绿脓杆菌(PA)核酸检测试剂盒   48T

肠道病毒EV71核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基

、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。