老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min

；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

兔肝实质分离自肝脏组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化
、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用
；肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里大的器官
，位于机体中的腹部位置
，在右侧横隔膜之下，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方，胃的上方。肝脏是机体消化系统中大的消化腺，为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构：肝脏位于右上腹，隐藏在右侧膈下和肋骨深面，大部分肝为肋弓所复盖
，仅在腹上区
、右肋弓间露出并直接接触腹前壁，肝上面则与膈及腹前壁相接。肝实质细胞是指具有肝功能的单位，是肝脏的基本组成单位之一。肝实质细胞与主要病生理变化
：急性肝炎、肝硬化、肝脓肿


。肝实质细胞属于中高度分化细胞
，生长营养需求高，在体外存活时间短
；细胞呈圆形或多角形，核大而圆，居中
，常染色质丰富
，部分有双核或多倍体核。肝脏作为体内重要的器官
，在整个物质代谢过程中具有广泛而多样的作用。

方法简介

：

实验室分离的兔肝实质采用混合酶灌流消化

、反复低速离心制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔肝实质经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件
：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态
：上皮细胞样

传代特性：可传1代
，不建议传代

消化液
：0.25%

培养条件
：气相
：空气，95%
；CO2，5%

兔肝实质体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息

，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题

，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

小鼠热休克蛋白试剂盒   小鼠热休克蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠热休克蛋白试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装）

，产品别名：小鼠热休克蛋白试剂盒、小鼠热休克蛋白试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠热休克蛋白9试剂盒   小鼠热休克蛋白9试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠热休克蛋白9试剂盒
，规格型号：96T/48T
，来源


：试剂盒（进口分装），产品别名
：小鼠热休克蛋白9试剂盒
、小鼠热休克蛋白9试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠缺血修饰白蛋白试剂盒   小鼠缺血修饰白蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠缺血修饰白蛋白试剂盒
，规格型号
：96T/48T
，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠缺血修饰白蛋白试剂盒
、小鼠缺血修饰白蛋白试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期
：6个月
。

小鼠全段甲状旁腺素试剂盒   小鼠全段甲状旁腺素试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠全段甲状旁腺素试剂盒，规格型号

：96T/48T
，来源：试剂盒（进口分装），产品别名
：小鼠全段甲状旁腺素试剂盒、小鼠全段甲状旁腺素试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠肾损伤分子1(Kim-1)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit G(IgG)试剂盒

HumanCeruloplasmin,CP/CERELISAKit 人铜蓝蛋白(CP/CER)试剂盒 96T/48T 进口分装

Equinemajorhistocompatibilitycomplex,MHC/ELA试剂盒马主要组织相容性复合体(MHC/ELA)试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母β-(β-AMYLASE)活性PNPG5酶偶联比色法定量检测试剂20次

Mousecoicoopieleasinghormone,CRHELISAKit小鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)试剂盒规格：96T/48T

IL12A & IL12B重组小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

Kruppel样因子4(KLF4)重组蛋白 Recombinant Kruppel Like Factor 4, Gut (KLF4)

RNASE1重组人 RNase A / Ribonuclease A / RNASE1 蛋白 Protein

CNTF Protein Human 重组人 CNTF 蛋白

GPT2 Protein Rat 重组大鼠 GPT2 蛋白

阿黑皮素原(POMC)重组蛋白 Recombinant Proopiomelanocortin (POMC)

CNTF Protein Human 重组人 CNTF 蛋白

DDR1重组小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (Fc 标签) Protein

IFNAR1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 蛋白

AIF1重组人 IBA1 / AIF1 蛋白 Protein

兔肝实质细胞大鼠膜联蛋白A5(ANXA5)试剂盒 ，英文名： ANXA5 ELISA Kit

Mouse ypsinogen activation peptide (TAP) ELISA Kit 小鼠原激活肽(TAP)试剂盒

Ratmelanocyteaibody,MCAbELISAKit 大鼠黑色素细胞抗体(MCAb)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGGT(Humangammaglamylanspeptidase)ELISAKit人γ谷氨酰转移酶

细胞甘油-3-0酸脱氢酶-2(Glycerol-3-PhosphateDehydrogenase-2)活性比色法定量试剂盒20次

RatsolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISAKit大鼠可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)试剂盒规格：96T/48T