老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5

、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6

、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

兔腹膜毛细血管内皮分离自腹膜组织；腹膜是存在于高等脊椎动物腹腔中的一层黏膜
，主要由间皮细胞和间质（结缔组织、纤维、毛细血管、淋巴管）构成，藉由结缔组织的支持所形成的一层膜状组织
。腹膜包覆大部分腹腔内的器官
，能分泌黏液润湿脏器的表面，减轻脏器间的摩擦。腹腔脏器的血液、淋巴和神经组织经由腹膜与外界相连
；腹膜也具有吸收撞击保护内脏的效果
。腹膜（peritoneum）为全身面积大
、配布复杂的浆膜，由皮及少量结缔组织构成，薄而光滑，呈半透明状。衬于腹、盆腔壁内表面的腹膜称为壁腹膜（parietal-peritoneum）或腹壁薄层；覆盖腹、盆腔器表面的部分称为脏腹膜（visceral-peritoneum）腹膜或腹膜脏层
。脏腹膜与壁腹膜互相延续、移行
，共同围成不规则的潜在性腔隙
，称为腹膜腔（peritoneal-cavity）
。腹膜腔是脏、壁两层腹膜之间相互移行围成的潜在性间隙。腹膜腔内有少量浆液
，在脏器活动时可减少摩擦。腹膜的主要生理功能
：①分泌功能；②吸收功能；③再生能力；④防御功能；⑤调理功能

。脏、壁腹膜都有丰富的毛细血管
，毛细血管上有不同的孔径
；腹膜的毛细血管和毛细血管后静脉是进行溶质交换的主要场所。

方法简介：

实验室分离的兔腹膜毛细血管内皮采用胶原酶-联合消化法结合化学试剂抑制法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的兔腹膜毛细血管内皮经CD31免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件
：PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基

：含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件
：气相
：空气
，95%；CO2
，5%

兔腹膜毛细血管内皮体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况

，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠趋化因子C-X-C-基元配体16(CXCL16)检测试剂盒 
，英文名： CXCL16 ELISA Kit

Mouse angiogenin (ANG) ELISA Kit 小鼠血管生长素(ANG)检测试剂盒

RatmammarycarcinomaMarker-CA153ELISAKit 大鼠癌标志物-CA153检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGSKELISAKit大鼠糖原合成酶激酶

细胞沉默调节蛋白1(SI1)活性比色法定量检测试剂盒20/50次

RatTumornecrosisfactorsolublereceptorⅡ,TNFsR-ⅡELISAKit大鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)检测试剂盒规格：96T/48T

CDH18重组食蟹猴 CDH18 / Cadherin-18 蛋白 Protein

IL-17(Interleukin-17 0.5mgIL-17(Interleukin-17)human 白介素-17抗原(人)

IL9重组人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白 Protein

HNRNPR Protein Human 重组人 HNRNPR / HNRNP-R / HNRNP R 蛋白 (His & GST 标签)

ICOS Protein Mouse 重组小鼠 ICOS / AILIM / CD278 蛋白 (Fc 标签)

IL-17(Interleukin-17 0.5mgIL-17(Interleukin-17)human 白介素-17抗原(人)

HNRNPR Protein Human 重组人 HNRNPR / HNRNP-R / HNRNP R 蛋白 (His & GST 标签)

CDH18重组食蟹猴 CDH18 / Cadherin-18 蛋白 Protein

ICOS Protein Mouse 重组小鼠 ICOS / AILIM / CD278 蛋白 (Fc 标签)

IL9重组人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白 Protein

小鼠FMS样酪酸激酶3配体(Flt3L)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat P-selectin (omein) ELISA Kit 大鼠网膜素(omein)检测试剂盒

Humahyroopin-releasinghormone,HELISAKIT 人促甲状腺素释放激素(H)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCollagen-likeBioproteinⅡ,HCBⅡ检测试剂盒人胶原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)检测试剂盒规格：96T/48T

组织Akt/PKB激酶总活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumaeceptorⅡfoheFcregionofimmunoglobulinG,FcγRⅡELISAKitGFc段受体Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)检测试剂盒规格：96T/48T

兔腹膜毛细血管内皮细胞兔结缔组织生长因子(rabbit CTGF)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

兔心肌钙蛋白I(rabbit cTnI)   作用
：   ELISA   规格
：      进口分装

兔心肌钙蛋白T(rabbit c)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

兔胱抑素C(rabbit Cystatin C)   作用：   ELISA   规格：      进口分装