老哥俱乐部

细胞简介：

兔肺成纤维分离自肺组织
；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔
，左右各一，覆盖于心之上。肺有分叶

，左二右三，共五叶。肺经肺系（指气管、支气管等）与喉、鼻相连
，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性

，具明显的蛋白质合成和分泌活动
，在一定条件下
，它可以实现跟纤维细胞的互相转化
；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的肺成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足
，表现为小的突起
；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团
；细胞生长迅速
，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦
、胞体较大
，细胞质透明，细胞核较大
，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合
，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。肺成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括
：构造和维持肺器官的正常形态
，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织
。

方法简介
：

公司实验室分离的兔肺成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来

，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的兔肺成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等

。

培养信息
：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化

；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定

：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

生长激素结合蛋白 (P)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

半乳糖凝集素 -3(Galectin-3)   作用
：   ELISA   规格
：      进口分装

脑神经相关生长蛋白 -43(GAP-43)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

生长分化因子 -15(GDF-15)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

豚鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)试剂盒 ，英文名
： AGEs ELISA Kit

Human concanavalin A (ConA) ELISA Kit 人刀A(ConA)试剂盒

MonkeyPlateletFactor4,PF-4ELISAKit血小板因子4(PF-4/CXCL4)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBLI(HumanBeta-Lactamaseinhibitors)ELISAKit人β内酰胺酶抑制剂

细菌/ATP酶(Na+/K+-ATPase)活性比色法定量检测试剂20次

RabbitmajorhistocompatibilitycomplexⅢ,MHCⅢ/RLAⅢELISAKit兔子主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHCⅢ/RLAⅢ)试剂盒规格：96T/48T

CTSE重组小鼠 Cathepsin E / CTSE 蛋白 Protein

ATF2 (Activating Transcription Factor2 0.5mgATF2 (Activating Transcription Factor2) 活化复制因子2(多肽)

CHEK1重组人 CHK1 / CHEK1 蛋白 (GST 标签) Protein

IL12A & IL12B Protein Human 重组人 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白

FIGF Protein Rat 重组大鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 蛋白 (Fc 标签)

ATF2 (Activating Transcription Factor2 0.5mgATF2 (Activating Transcription Factor2) 活化复制因子2(多肽)

IL12A & IL12B Protein Human 重组人 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白

CTSE重组小鼠 Cathepsin E / CTSE 蛋白 Protein

FIGF Protein Rat 重组大鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 蛋白 (Fc 标签)

CHEK1重组人 CHK1 / CHEK1 蛋白 (GST 标签) Protein

兔肺成纤维细胞大鼠内皮素受体B(EB)试剂盒 ，英文名
： EB ELISA Kit

Monkey ai liver cell membrane aibody (LMA) ELISA Kit 猴抗肝细胞膜抗体(LMA)试剂盒

RatThyroxineaibody,TAbELISAKit 大鼠甲状腺素抗体(TAb)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGKRP(Humanglucokinaseregulatoryprotein)ELISAKit人葡萄糖激酶调节蛋白

细胞脯羟化酶(prolilhydroxylase)活性比色法定量试剂盒20次

RatsolubleToll-likereceptor6,sTLR-6ELISAKit大鼠可溶性Toll样受体6(sTLR6)试剂盒规格
：96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。