老哥俱乐部

细胞简介：

兔成骨分离自颅骨组织；颅骨位于脊柱上方
，由23块形状和大小不同的扁骨和不规则骨组成。除下颌骨及舌骨外，其余各骨彼此借缝或软骨牢固连结，起着保护和支持脑、感觉器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用。颅分脑颅和面颅两部分。脑颅位于颅的后上部，内有颅腔，容纳脑
，共8块。面颅为颅的前下部分
，包含眶、鼻腔
、口腔等结构，构成面部的支架，共15块。成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨基质的合成、分泌和矿化
。骨不断地进行着重建
，骨重建过程包括破骨细胞贴附在旧骨区域，分泌酸性物质溶解矿物质
，分泌蛋白酶消化骨基质
，形成骨吸收陷窝；其后，成骨细胞移行至被吸收部位
，分泌骨基质，骨基质矿化而形成新骨；破骨与成骨过程的平衡是维持正常骨量的关键。成骨细胞培养不仅有助于了解骨形成机制

、骨骼系统疾病的分子和细胞学基础，也是药物筛选、生物材料开发和生物工程研究的重要手段。

方法简介：

公司实验室分离的兔成骨采用先用短时间消化、后用胶原酶反复消化制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的兔成骨经ALP染色检测
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂

、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次
；

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传3-5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠巨噬细胞性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)试剂盒   96T/48T

小鼠巨噬细胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)试剂盒   96T/48T

小鼠巨噬细胞替代激活相关化学因子1(AmAC-1)试剂盒   96T/48T

小鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)试剂盒   96T/48T

小鼠卵巢癌标志物CA125ELISA 试剂盒 96T/48T

Human glucose oxidase (GOD) ELISA Kit 人葡萄糖氧化酶(GOD)试剂盒

HumanCyclicAMPresponseelemebindingprotein,CREBELISAKit 人cAMP反应元件结合蛋白(CREB)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanactivatedproteinCresistance,APCR试剂盒人活化蛋白C抵抗素(APCR)试剂盒规格
：96T/48T

脂质过氧化物4-羟基壬烯酸(4-HNE)高效液相色谱(HPLC)分析试剂盒20次

MouseAngiotensinconveingenzyme,ACEELISAKit小鼠血管紧张素转化酶(ACE)试剂盒规格

：96T/48T

COLEC12重组大鼠 CLP1 / COLEC12 蛋白 Protein

GPA33(glycoprotein A33 transmembrane 0.5mgGPA33(glycoprotein A33 transmembrane) 糖蛋白A33(跨膜)抗原

IFNL1重组人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白 Protein

CXCL10 Protein Human 重组人 CXCL10 / Crg-2 蛋白

OMG Protein Mouse 重组小鼠 OMGP / OMG 蛋白 (aa 1-245, His 标签)

GPA33(glycoprotein A33 transmembrane 0.5mgGPA33(glycoprotein A33 transmembrane) 糖蛋白A33(跨膜)抗原

CXCL10 Protein Human 重组人 CXCL10 / Crg-2 蛋白

COLEC12重组大鼠 CLP1 / COLEC12 蛋白 Protein

OMG Protein Mouse 重组小鼠 OMGP / OMG 蛋白 (aa 1-245, His 标签)

IFNL1重组人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白 Protein

兔成骨细胞大鼠内皮素转化酶1(ECE1)试剂盒

，英文名
： ECE1 ELISA Kit

Mouse platelet derived growth factor soluble receptor alpha (PDGFsR- alpha) ELISA Kit 小鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)试剂盒

Ratthyroidstimulatinghormonereceptoraidoby,AbELISAKit 大鼠抗促甲状腺素受体抗体(Ab)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGlp-1ELISAKit大鼠胰高血糖素样肽1

细胞脯(proline)含量比色法定量试剂盒20次

Ratsolubletumornecrosisfactor-relatedapoptosisinducingligand,sAILELISAKit大鼠可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sAIL)试剂盒规格
：96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。