老哥俱乐部

细胞简介：

兔肠成纤维分离自肠道组织；肠道指的是从胃幽门至门的消化管
。肠是消化管中长的一段，也是功能重要的一段
。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠3大段。大量的消化作用和几乎全部消化产物的吸收都是在小肠内进行的

，大肠主要浓缩食物残渣，形成粪便，再通过直肠经门排出体外。肠道堪称身体劳累的器官——每天不停地消化、吸收食物
，以提供足够的养分
，其实它的功能还远不止此——它还是机体内大的微生态系统。各种哺乳动物肠的结构和功能基本相似
。肠壁结构一般分4层
，由外向内依次为：浆膜层（腹腔脏层），平滑肌层
，黏膜下层和黏膜层
。平滑肌层的外层为纵行肌纤维，内层为环形肌纤维
，两者都以螺旋式走行，它们以收缩和舒张来完成肠的机械性消化。黏膜层又分为3层
：靠近黏膜下层的是一层平滑肌，称为黏膜肌层
。其次为结缔组织，又称为固有层。后面向肠腔的是一层柱状上皮细胞构成的黏膜
。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构
，其细胞核呈规则的卵圆形
，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化
；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。

方法简介：

实验室分离的兔肠成纤维采用胶原酶-联合消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的兔肠成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定

，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基
：含FBS
、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性
：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件
：气相：空气，95%
；CO2
，5%

兔肠成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min

；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠聚集蛋白聚糖(AGC)检测试剂盒 ，英文名
： AGC ELISA Kit

Monkey Vascuoar endothelial cell growth factor receptor -3 (VEGFR-3) ELISA Kit血管内皮细胞生长因子受体-3(VEGFR-3)检测试剂盒

RatterminalcomplemecomplexC5b-9,TCCC5b-9ELISAKit 大鼠末端补体复合物C5b-9(TCCC5b-9)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFree-T3ELISAKit大鼠游离三甲状腺原

细胞活力蓝色荧光检测试剂盒50次

RatPhosphotylinosital3kinase,PI3KELISAKit大鼠0酸肌醇3激酶(PI3K)检测试剂盒规格：96T/48T

APOA1重组小鼠 ApoA1 蛋白 Protein

蛋白二硫键异构酶(PDI)重组蛋白 Recombinant Protein Disulfide Isomerase (PDI)

RPRD1B重组人 RPRD1B 蛋白 Protein

IFNL1 Protein Human 重组人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白

SELL Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白

AATK peptide 细胞凋亡关联酪激酶抗原 0.5mgAATK peptide 细胞凋亡关联酪激酶抗原

IFNL1 Protein Human 重组人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白

OMG重组小鼠 OMGP / OMG 蛋白 (aa 1-245, His 标签) Protein

COLEC12 Protein Rat 重组大鼠 CLP1 / COLEC12 蛋白

CXCL10重组人 CXCL10 / Crg-2 蛋白 Protein

豌豆凝集素(PSA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat cardiac anscription factor GATA4 大鼠心肌转录因子GATA4

Humanai-insulieceptoraibody,AIRAELISAKit 人抗胰岛素受体抗体(AIRA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCreatineKinaseMBisoenzyme,CK-MB检测试剂盒人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)检测试剂盒规格：96T/48T

组织C-TAK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanProstaticAcidPhosphatase，PAPELISAKit人前列腺酸性0酸酶(PAP)检测试剂盒规格：96T/48T

兔肠成纤维细胞肽酶抑制因子3   英文名称：   Human Peptidase Inhibitor 3   规格：      英文缩写
：   PI-3

过氧化物酶体增殖物活化受体γ   英文名称：   Human Peroxisome Proliferators Activated Receptor γ   规格：      英文缩写：   PPARγ

0酸化SMAD2/3抗体   英文名称
：   Human Phosphor Mothers Against Decapeaplegic Homolog 2/3 aibody   规格：      英文缩写：   PSMAD2/3 Ab

0酸化核因子κB   英文名称：   Human phosphor-Nuclear Factor kappa B   规格：      英文缩写
：   pNFκB

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例

、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况

，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1


：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。