老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养

；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

兔背根神经元分离自脊椎背根神经节；感觉神经母细胞发出轴突，呈束状
，左右对称地从神经管的背部进入，此时的脊神经节即改称为背根神经节

。神经系统基本的结构和功能单位是神经元
，即神经细胞，其大小和外观在中枢神经系统中差异很大。但都具有胞体和树突、轴突。胞体又叫核周体，内含神经丝、微管
、内质网、游离核糖体和一个有明显核仁的核
。一些大神经元突起的粗面内质网可用Nissl染色显示，在光镜下是灰蓝色斑块状

，称为尼氏小体。树突和轴突是神经元的突起
，能在神经元之间传递电冲动，突起的大小和形态各不相同
，很难用常规的显微镜鉴别。脊髓背根神经节是周围神经的主要传入神经元
，是感觉信号传导的中继站。背根神经元细胞的获取较为困难，需要在尽可能短的时间内通过解剖显微镜获得一定量的背根神经节组织。神经组织体外培养方法是当代神经科学一项很有价值的研究手段
，背根神经节富含周围神经系统感觉神经元
，已广泛用于轴突的导向及再生、中枢及周围神经系统的髓鞘形成、神经营养因子作用及受体分布
、神经细胞衰老机制
、基因治疗、组织工程等神经科学的研究。

方法简介：

实验室分离的兔背根神经元采用胶原酶-联合消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的兔背根神经元经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件：PLL（0.1mg/ml）

培养基
：含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：神经元细胞样

传代特性：属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液：0.125%

培养条件
：气相
：空气，95%；CO2，5%

兔背根神经元体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中

，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠转缩酶(TALDO1)检测试剂盒 
，英文名： TALDO1 ELISA Kit

Mice of aithrombin III (AT- III) aibody ELISA Kit 小鼠抗Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)检测试剂盒

Mousemajorhistocompatibilitycomplex-Ⅱ,MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISAKit 小鼠主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ检测试剂盒 96T/48T 进口分装

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氨基酸补充溶液(10X)100毫升

ELISAKitATGA/TGAB大鼠抗甲状腺球蛋白抗体

HA重组甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

phospho-p38 ERK/MAPK14 (pThr180/pTyr182 0.5mgphospho-p38 ERK/MAPK14 (pThr180/pTyr182) peptide 0酸化原活化蛋白激酶p38抗原

UCHL3重组人 UCHL3 / UCH-L3 蛋白 Protein

IL15 Protein Human 重组人 IL-15 / IL15 / Interleukin 15 蛋白

PVRL2 Protein Human 重组人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 蛋白

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豚鼠肾素(Renin)检测试剂盒 ，英文名： Renin ELISA Kit

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细菌尼罗红染色试剂盒100次

RabbitLysozyme,LZMELISAKit兔(LZM)检测试剂盒规格
：96T/48T

兔背根神经元细胞上腺素   英文名称：   Adrenalin/   英文缩写

：   ADR   规格：  

晚期糖基化终末产物   英文名称：   advanced glycosylation end products   英文缩写：   AGEs   规格：  

0酸化AKT蛋白   英文名称

：   phosphorylation AKT   英文缩写
：   p-AKT   规格：  

转录因子AP-1   英文名称：   anscription Factors AP-1   英文缩写
：   AP-1   规格
：