老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介
：

人子宫内膜上皮分离自子宫组织
；子宫是孕育胎儿的器官
，位于盆腔中部
，膀胱与直肠之间，其位置可随膀胱与直肠的充盈程度或体位而有变化。子宫的正常位置主要依靠子宫诸韧带、盆膈、尿生殖膈及会阴中心腱等结构维持，这些结构受损或松弛时，可以引起子宫脱垂
。子宫内膜即黏膜
，由上皮（属单层柱状上皮，有分泌细胞和纤毛细胞二种）和固有膜（由结缔组织构成，其内有大量的星形细胞
，称为基质细胞）组成，子宫内膜可分为浅表的功能膜和深部的基底层，功能层较厚

，约占内膜厚度的4/5
；基底层较薄较致密，约占1/5，功能层可剥脱
，而基底层不可剥脱。子宫内膜上皮细胞主要功能
：①子宫内膜亦称子宫黏膜，是指构成哺乳类子宫内壁的一层；②子宫内膜对动情素和孕激素都起反应，因此可随着性周期（发情周期、月经周期）发生显著的变化。子宫内膜与胚胎附植密切相关

，在生殖生理的研究中占重要地位
。在胚胎与母体“对话"的过程中
，子宫内膜上皮细胞充当了极其重要的角色。子宫内膜构成雌性哺乳动物子宫壁的内层，位于子宫腔面，在动物生殖生理活动中占有重要地位
。子宫和子宫内膜是维持雌性动物生理功能和生育能力的重要器官，子宫内膜的再生修复是子宫的重要生理功能
。体外培养的子宫内膜上皮细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

方法简介
：

公司实验室分离的人子宫内膜上皮采用胶原酶消化法，结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人子宫内膜上皮经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌

、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%
；CO2，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

人真胰岛素(TI)ELISA 试剂盒

Human tumor necrosis factor alpha conveing enzyme (TACE) ELISA Kit 人肿瘤坏死因子α转化酶(TACE)检测试剂盒

Humanproliferatingcellnuclearaigenaibody,PCNAELISAKit 人抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanImmunoreactivegrowthhormone,irGH检测试剂盒人免疫反应性生长激素(irGH)检测试剂盒规格

：96T/48T

组织基质金属蛋白酶(MMP-14)活性荧光定量检测试剂盒20次(10样本)

HumanleukocyteaigenA

，HLA-AELISAKit人类白细胞抗原A(HLA-A)检测试剂盒规格
：96T/48T

EPHA4重组食蟹猴 EphA4 蛋白 Protein

Melamine/BSA 三聚胺偶联牛血清白蛋白 1mgMelamine/BSA 三聚胺偶联牛血清白蛋白

FES重组人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 标签) Protein

ING4 Protein Human 重组人 ING4 蛋白

EPO Protein Mouse 重组小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白

Melamine/BSA 三聚胺偶联牛血清白蛋白 1mgMelamine/BSA 三聚胺偶联牛血清白蛋白

ING4 Protein Human 重组人 ING4 蛋白

EPHA4重组食蟹猴 EphA4 蛋白 Protein

EPO Protein Mouse 重组小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白

FES重组人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 标签) Protein

豚鼠白介素8(IL-8)检测试剂盒

，英文名： IL-8 ELISA Kit

Two adenosine monophosphate (ADP) ELISA Kit 人二0酸腺苷(ADP)检测试剂盒

rabbitSolubleprotein-100B,S-100BELISAKit 兔子S100B蛋白(S-100B)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta-EPRELISAKit大鼠β内啡肽受体

细菌血液琼脂平板50个

RabbitHeatShockProtein20,HSP-20ELISAKit兔热休克蛋白20(HSP-20)检测试剂盒规格：96T/48T

人子宫内膜上皮细胞人脂蛋白a检测试剂盒   人脂蛋白a试剂盒   规格型号：96T/48T   人脂蛋白a试剂盒
，规格型号
：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：人脂蛋白a试剂盒、人脂蛋白a 检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

人脂阿拉伯甘露聚糖检测试剂盒   人脂阿拉伯甘露聚糖试剂盒   规格型号：96T/48T   人脂阿拉伯甘露聚糖试剂盒，规格型号
：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：人脂阿拉伯甘露聚糖试剂盒、人脂阿拉伯甘露聚糖检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

人正常T细胞表达和分泌因子检测试剂盒   人正常T细胞表达和分泌因子试剂盒   规格型号
：96T/48T   人正常T细胞表达和分泌因子试剂盒，规格型号：96T/48T


，来源：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：人正常T细胞表达和分泌因子试剂盒、人正常T细胞表达和分泌因子检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

人整合素连接激酶1检测试剂盒   人整合素连接激酶1试剂盒   规格型号：96T/48T   人整合素连接激酶1试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源
：检测试剂盒（进口分装）
，产品别名：人整合素连接激酶1试剂盒

、人整合素连接激酶1 检测试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。