老哥俱乐部

细胞简介：

人主动脉内皮分离自主动脉组织

；主动脉是体循环的动脉主干。其运行路径为：升主动脉起于左心室，至右侧第2胸肋关节高度移行为主动脉弓，弓行向左后至第4胸椎体下缘移行为降主动脉
；在第12胸椎体高度穿膈的主动脉裂孔移行为腹主动脉，以上为胸主动脉，至第4腰椎体下缘分为左
、右髂总动脉；髂总动脉在骶髂关节高度分为髂内、外动脉。主动脉内皮细胞是覆盖在主动脉内面的单层细胞，可分泌一系列血管活性物质而保持血管稳态，当其受到炎症或其它因素刺激后稳态被破坏而导致一些心血管疾病的发生。因此
，主动脉内皮细胞已成为研究心血管疾病发病机制及治疗药物的工具。内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞
，由一层扁平细胞所组成。它形成血管的内壁
，是血管管腔内血液及其他血管壁（单层鳞状上皮）的接口。内皮细胞是沿着整个循环系统，由心脏直至小的微血管。

方法简介：

公司实验室分离的人主动脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人主动脉内皮经CD31免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂

、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二

、免疫荧光鉴定

：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

豚鼠白介素22(IL-22)检测试剂盒 ，英文名
： IL-22 ELISA Kit

Human ubiquitin protein (Ub) ELISA Kit 人泛素蛋白(Ub)检测试剂盒

RabbitIerleukin1β,IL-1βELISAKit 兔子白介素1β(IL-1β)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta-EP(RabbitBeta-Endorphin)ELISAKit兔子β内啡肽

细菌样品二维电泳裂解液用于细菌蛋白二维电泳

RabbitGlycatedhemoglobinA1c,A1cELISAKit兔糖化血红蛋白A1c(A1c)检测试剂盒规格：96T/48T

HA重组甲型流感 H5N1 (A/duck/Laos/3295/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin 0.1mgShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Gln11) 海葵神经毒素(35肽)

SERPINF1重组人 SerpinF1 / PEDF 蛋白 Protein

IL5 Protein Human 重组人 IL5 / Interleukin 5 蛋白

LXN Protein Human 重组人 Latexin / LXN / TCI 蛋白

ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin 0.1mgShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Gln11) 海葵神经毒素(35肽)

IL5 Protein Human 重组人 IL5 / Interleukin 5 蛋白

HA重组甲型流感 H5N1 (A/duck/Laos/3295/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

LXN Protein Human 重组人 Latexin / LXN / TCI 蛋白

SERPINF1重组人 SerpinF1 / PEDF 蛋白 Protein

豚鼠超氧化物歧化酶1(SOD1)检测试剂盒 ，英文名
： SOD1 ELISA Kit

Human ierferon regulatory factor (IRF) ELISA Kit 人干扰素调节因子(IRF)检测试剂盒

Rabbitmyelinbasicprotein,MBPELISAKit 兔子髓0脂碱性蛋白(MBP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforAZU(Humanazurocidin)ELISAKit人天青杀素

线虫细胞分离试剂盒20次

RabbitapoproteinB100,apo-B100ELISAKit兔载脂蛋白B100(apo-B100)检测试剂盒规格
：96T/48T

人主动脉内皮细胞人中性粒细胞防御素1-3(HNP1-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人血浆抗凝蛋白S(PS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人血浆抗凝蛋白C(PC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息

，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。