老哥俱乐部

细胞简介：

人支气管平滑肌分离自支气管组织
；支气管（Bronchi）
，是指由支气管分出的各级分枝
，由支气管分出的一级支气管，即左
、右主支气管

。左主支气管与右主支气管相比较
，前者较细长，走向倾斜
；后者较粗短，走向较前者略直，所以经支气管堕入的异物多进入右主支气管
。支气管和支气管还有以区别就是
，支气管是以“C"型的支气管软骨为支架，而支气管不是。支气管平滑肌细胞主要功能：①支气管平滑肌细胞能维持支气管张力，保持支气管形态；②支气管平滑肌特异的超微结构特点和调节机制是支气管正常生理功能的基础；③支气管平滑肌通过分泌细胞因子和趋化因子等促炎介质，发挥免疫调节功能。支气管平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一
，呈梭形、不规则形、三角形或扇形

，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合
，多数细胞伸展呈长梭形
，胞浆丰富

，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长
，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状
；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快
，4-6天即可汇合
，并保持上述形态学特征和生长特点
。

方法简介：

公司实验室分离的人支气管平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人支气管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1

、HBV


、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等

。

培养信息：

培养基 含FBS

、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次


，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h

；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠L选择素(L-Selectin/CD62L)试剂盒     试剂盒   组装/原装

小鼠L苯解酶(PAL)试剂盒     试剂盒   组装/原装

小鼠KN-62试剂盒     试剂盒   组装/原装

小鼠I型胶原蛋白（COL-1）试剂盒     试剂盒   组装/原装

小鼠骨胶原交联(Cr)ELISA 试剂盒

Rat annexin V (ANX- V) ELISA Kit 大鼠膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)试剂盒

Humansecretieceptor,SRELISAKit 人促胰液素/分泌素受体(SR)试剂盒 进口分装

Humanai-Reticulinaibody,ARA试剂盒人抗网硬蛋白抗体(ARA)试剂盒

植物细胞原生质体电转试剂盒10次

HumaumornecrosisfactorsolublereceptorⅡ,TNFsR-ⅡELISAKit人坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)试剂盒

CSF1R重组大鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His 标签) Protein

DBH (Dopamine- Beta-Hydroxylase 0.5mgDBH (Dopamine- Beta-Hydroxylase) 多巴胺β羟化酶(抗原)

FABP3重组人 FABP3 / H-FABP / M-FABP 蛋白 Protein

FAM3B Protein Human 重组人 FAM3B 蛋白

TIMD4 Protein Mouse 重组小鼠 TIM4 / TIMD4 蛋白 (His 标签)

DBH (Dopamine- Beta-Hydroxylase 0.5mgDBH (Dopamine- Beta-Hydroxylase) 多巴胺β羟化酶(抗原)

FAM3B Protein Human 重组人 FAM3B 蛋白

CSF1R重组大鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His 标签) Protein

TIMD4 Protein Mouse 重组小鼠 TIM4 / TIMD4 蛋白 (His 标签)

FABP3重组人 FABP3 / H-FABP / M-FABP 蛋白 Protein

人支气管平滑肌细胞大鼠葡萄糖转运蛋白3(GL3)试剂盒 ，英文名： GL3 ELISA Kit

Mouse heme oxygenase 1 (HO-1) ELISA Kit 小鼠血红素氧合酶1(HO-1)试剂盒

Ratlipoprotein-associatedphospholipaseA2,Lp-PL-A2ELISAKit 大鼠脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)试剂盒 进口分装

CLIAKitforGP-MM(MouseGlycogenphosphorylaseMM)ELISAKit小鼠糖原0酸化酶同工酶MM

细胞蛋酸酶2A(PP2A)活性比色法定量试剂盒20次(10个样本)

RatToll-likereceptor9,TLR-9ELISAKit大鼠Toll样受体9(TLR-9/CD289)试剂盒

注意事项

：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。