老哥俱乐部

细胞简介：

人真皮微血管内皮分离自真皮组织；真皮，位于表皮深层，向下与皮下组织相连
，真皮结缔组织的胶原纤维和弹性纤维互相交织在一起


，埋于基质内。其内分布着各种结缔组织细胞和大量的胶原纤维弹性纤维，使皮肤既有弹性，又有韧性。其由两层组成——乳头层与网状层。真皮的结构组成是胶原蛋白、弹性纤维以及基质。微血管内皮细胞（MEC）在炎症反应
、肿瘤生长、创面愈合过程中起着非常重要的作用。在创面愈合研究领域，由于表皮细胞、真皮成纤维细胞体外培养技术的成熟，人们对这两种细胞早已进行了大量深入的研究
。与之相比，对参与创面愈合过程的另一种主要细胞——真皮微血管内皮细胞，则因其体外分离培养技术的困难而使相关的研究受限。

方法简介
：

公司实验室分离的人真皮微血管内皮采用胶原酶-混合消化法结合密度梯度离心法、后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人真皮微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s

，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠热休克蛋白β8(HSPβ8)检测试剂盒 ，英文名： HSPβ8 ELISA Kit

Mouse vascular endothelial cell growth factor D (VEGF-D) ELISA Kit 小鼠血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)检测试剂盒

RatAquaporin4,AQP-4ELISAKit 大鼠水通道蛋白4(AQP-4)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGuineapigImmunoglobulinG,IgGELISAKit豚鼠免疫球蛋白G

细胞长链脂酰氧化酶(acyl-CoAoxidase)活性比色法定量检测试剂盒20次

RatTumorSpecificGrowthFacter/tumorsuppliedgroupoffactor,TGSFELISAKit大鼠肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TGSF)检测试剂盒规格：96T/48T

CD48重组人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 Protein

0脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)重组蛋白 Recombinant Glypican 1 (GPC1)

IDI2重组人 IDI2 蛋白 Protein

CLEC4A Protein Human 重组人 CLEC4A / CLECSF6 / DCIR 蛋白

HA Protein H9N2 重组甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/35820/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

0脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)重组蛋白 Recombinant Glypican 1 (GPC1)

CLEC4A Protein Human 重组人 CLEC4A / CLECSF6 / DCIR 蛋白

CD48重组人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 Protein

HA Protein H9N2 重组甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/35820/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

IDI2重组人 IDI2 蛋白 Protein

小鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human pemphigus foliaceus (PF) ELISA Kit 人落叶型天疱疮抗体(PF)检测试剂盒

HumanCompleme1q,C1qELISAKit 人补体1q(C1q)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

DuckIerleukin1,IL-1检测试剂盒鸭白介素1(IL-1)检测试剂盒规格
：96T/48T

载体/DNA产物去0酸化处理试剂盒10次

Mousedeoxypyridinoline,DPDELISAKit小鼠脱氧酚/脱氧啉(DPD)检测试剂盒规格
：96T/48T

人真皮微血管内皮细胞小鼠神经营养因子3(-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠神经营养因子4(-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠骨保护素(OPG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠B因子(BF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代

。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。