老哥俱乐部

细胞简介：

人小梁网分离自眼球组织；小梁网由角膜基质纤维
、后界膜和角膜内皮向后扩展而成，覆盖在巩膜静脉窦的内侧。小梁网细胞在眼内压调节中起着关键作用；小梁网细胞内有特定的神经递质和神经肽受体，其中包括肾上腺素
、乙酰和神经肽Y

。青光眼是由于眼内压力升高而造成的一种不可逆致盲眼病，小梁网细胞的体外培养是青光眼病因学研究的重要手段之一。在小梁网细胞中，一长串的血管活性多肽和生长因子能够触发细胞内信号传导机制，小梁网细胞可合成不同类型的细胞外基质蛋白以及金属蛋白酶。形态学观察可见

，刚从组织块长出的原代细胞，形态各异
，多数呈星状或不规则形
。细胞有胞突，核椭圆形，胞体肥大，胞浆丰富，且可见吞噬颗粒

。随着细胞的增生及相互融合为单层，细胞的形态趋于一致
。胞浆的色素颗粒及胞突消失，排列紧密呈类似上皮细胞的扁椭圆形或不规则形。胞体透亮，包膜清晰
。

方法简介：

公司实验室分离的人小梁网采用组织贴块法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人小梁网经NSE（神经元特异性烯醇化酶）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体、细菌

、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS

、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化

；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二

、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠内皮细胞TEK酪酸激酶(Tie2)检测试剂盒
，英文名
： Tie2 ELISA Kit

Monkey high sensitive C reactive protein (hs-CRP) ELISA Kit 猴超敏C反应蛋白(hs-CRP)检测试剂盒

Ratcatecholamine,CAELISAKit 大鼠儿茶酚胺(CA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGLP-1(human)人胰高血糖素样肽1

细胞冯库萨(VONKOSSA)钙染色试剂盒50次

RatsolubleVascuolarcelladhesionmolecule1,sVCAM-1ELISAKit大鼠可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)检测试剂盒规格：96T/48T

TNFRSF1A重组大鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 Protein

DRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase 0.5mgDRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase)N terminal 双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗原(N端)

LOXL2重组人 LOXL2 / Lysyl oxidase homolog 2 蛋白 Protein

IgG4 Protein Human 重组人 IgG4-Fc 蛋白 (108 Ser/Pro)

CTSA Protein Mouse 重组小鼠 Cathepsin A / CTSA 蛋白

DRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase 0.5mgDRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase)N terminal 双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗原(N端)

IgG4 Protein Human 重组人 IgG4-Fc 蛋白 (108 Ser/Pro)

TNFRSF1A重组大鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 Protein

CTSA Protein Mouse 重组小鼠 Cathepsin A / CTSA 蛋白

LOXL2重组人 LOXL2 / Lysyl oxidase homolog 2 蛋白 Protein

豚鼠血清总补体(CH50)检测试剂盒 ，英文名
： CH50 ELISA Kit

Human proteinase 3 aibody (PR3Ab) ELISA Kit 人蛋白酶3抗体(PR3Ab)检测试剂盒

MonkeyHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBMP-2(HumanBonemorphogeneticprotein2)ELISAKit人骨成型蛋白2

细菌内毒素比色法定量检测试剂盒20次

Rabbitmaixmetalloproteinase2/GelatinaseA,MMP-2ELISAKit兔基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/GelatinaseA)检测试剂盒规格：96T/48T

人小梁网细胞噬酸性粒细胞趋化因子 -2(Eotaxin-2)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

促红细胞生成素 (EPO)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

促红细胞生成素受体 ( EPO Receipter)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

可溶性血管内皮细胞蛋白 C 受体 (sEPCR)   作用
：   ELISA   规格
：      进口分装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息

，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。